[发明专利]纹状体类脑器官及其培养基、培养方法和应用

权利要求书

1.一种诱导纹状体类脑器官产生的培养基，其特征在于，所述培养基为添加有SHH因子的PM培养液，优选所述SHH因子的浓度为200±50ng/ml。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述SHH因子在所述PM培养液中的浓度为200±5ng/ml，优选为200±1ng/ml，更优选为200ng/ml。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述PM培养液为含有以下浓度的成分1±0.1％(v/v)N2添加剂,2±0.2％(v/v)B27无维生素A，0.15±0.02％(w/v)葡萄糖及100±5uMβ-巯基乙醇的DMEM/F12培养基。

4.一种纹状体类脑器官的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.使用细胞消化液Accutase孵育人胚胎干细胞后，将hESC解离成单细胞悬液，在神经诱导培养基NIM中进行培养，每隔45-52小时更换新的神经诱导培养基NIM；

S2.在培养10±0.5天时，将细胞转移到低吸附的孔板中，换成上述诱导纹状体类脑器官产生的培养基中进行培养；每隔45-52小时更换新的述诱导纹状体类脑器官产生的培养基，直到分化第18±0.5天；

S3.然后将细胞更换到新的DM培养液中进行培养，即得所述纹状体类脑器官。

5.根据权利要求4所述的纹状体类脑器官的培养方法，其特征在于，所述DM培养液中添加有以下终浓度的生长因子：20±1ng/ml脑源性神经营养因子，20±1ng/ml胶质细胞源性神经营养因子及200±10μM抗坏血酸维生素C。

6.根据权利要求4或5所述的纹状体类脑器官的培养方法，其特征在于，所述DM培养液的成分包括DMEM/F12与Neurobasal的体积比为1，0.5±0.01％N2,1±0.1％B27,1±0.1％GlutaMAX,0.5±0.01％(v/v)MEM-NEAA,50±5μMβ-巯基乙醇，0.025±0.001％(v/v)胰岛素。

7.根据权利要求4或5所述的纹状体类脑器官的培养方法，其特征在于，所述NIM培养基，按照终浓度组成包括：DMEM/F12与Neurobasal的体积比为1，1±0.1％N2，2±0.1％B27，1±0.1％GlutaMAX，100±2nM LDN-193189，10±1μMSB-431542，2±0.1μM XAV-939及50±0.5μM Y27632。

8.根据权利要求4或5所述的纹状体类脑器官的培养方法，其特征在于，S1步骤中，以每孔4～8x10⁴个细胞的密度铺于低吸附圆底的孔板进行培养。

9.根据权利要求4-8任一项所述培养方法获得的纹状体类脑器官。

10.权利要求9所述述纹状体类脑器官在筛选药物、疾病研究或细胞研究上的用途。