[发明专利]一种免预杂交的Northern blot杂交液及其应用

说明书

本发明公开了一种免预杂交的Northernblot杂交液及其应用，该免预杂交的Northernblot杂交液的pH值为7.4，包括如下终浓度的组分：5×SSC、20mMNa₂HPO₄、质量百分比为7％的SDS、质量百分比为0.02％的聚乙烯吡咯烷酮、质量百分比为0.02％的聚蔗糖400、质量百分比为0.02％的BSA、质量百分比为0.5％的吐温‑20；所述5×SSC含有0.75M的NaCl和0.075M的柠檬酸钠。采用本发明的Northernblot杂交液，无需进行杂交液与膜的预杂交步骤，即可直接将探针加入到杂交液中，使探针与尼龙膜上RNA进行杂交，减少实验步骤和时间。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种免预杂交的Northern blot杂交液及其应用。

背景技术

Northern blot是主要用于检测基因mRNA表达水平变化的重要手段之一。相较于其他检测基因表达方法(如QPCR、基因芯片、RNA酶保护实验等)，Northern blot具有灵敏度高、特异性强及假阳性低等特点，使得Northern blot实验被认为检测基因相对表达的最真实可靠的实验方法。Northern blot实验过程中，将探针与带有RNA的膜进行杂交是必不可少的实验步骤，但是目前无论是购买的杂交液还是公开的杂交液配方，在进行探针与膜杂交前均需要杂交液与膜进行预杂交，预杂交步骤需要0.5-4小时不等，严重增加了实验的时长，耗费实验人员的精力。因此，研发一种免预杂交的Northern blot杂交液具有重要意义。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种免预杂交的Northernblot杂交液及其使用方法。

本发明第一方面提供一种免预杂交的Northern blot杂交液，所述Northern blot杂交液的pH值为7.4，包括如下终浓度的组分：5×SSC、20mMNa₂HPO₄、质量百分比为7％的SDS、质量百分比为0.02％的聚乙烯吡咯烷酮、质量百分比为0.02％的聚蔗糖400、质量百分比为0.02％的BSA和质量百分比为0.5％的吐温-20；

所述5×SSC含有0.75M的NaCl和0.075M的柠檬酸钠。

本发明第二方面提供所述免预杂交的Northern blot杂交液的配置方法，所述配置方法包括：先用无菌水溶解Na₂HPO₄，调节pH值为7.4后，再分别加入其他组分充分溶解，即得。

进一步地，所述配置方法包括：先用200mL无菌水溶解2.84gNa₂HPO₄，经磷酸盐调pH值为7.4后，再分别加入250mL20×SSC、70gSDS、0.2g聚乙烯吡咯烷酮、0.2g聚蔗糖400、0.2gBSA和5mL吐温-20，充分溶解后，定容至1L，即得；

所述20×SSC的pH值为7.4，含有3M的NaCl和0.3M的柠檬酸钠。

本发明第三方面提供一种用于制备免预杂交的Northern blot杂交液的试剂盒，所述试剂盒包括：20×SSC、Na₂HPO₄、SDS、聚乙烯吡咯烷酮、聚蔗糖400、BSA和质量百分比为100％的吐温-20；

所述20×SSC的pH值为7.4，含有3M的NaCl和0.3M的柠檬酸钠。

本发明第四方面提供所述免预杂交的Northern blot杂交液或所述试剂盒在Northern blot中的应用。

本发明第五方面提供Northern blot中探针与RNA杂交的方法，包括：将探针和所述免预杂交的Northern blot杂交液加入到交联RNA的尼龙膜中，使探针与尼龙膜上RNA进行杂交。