[发明专利]一种免预杂交的Northern blot杂交液及其应用

权利要求书

1.一种免预杂交的Northern blot杂交液，其特征在于，所述Northern blot杂交液的pH值为7.4，由如下终浓度的组分组成：5×SSC、20 mM Na₂HPO₄、质量百分比为7%的SDS、质量百分比为0.02%的聚乙烯吡咯烷酮、质量百分比为0.02%的聚蔗糖400、质量百分比为0.02%的BSA、和质量百分比为0.5%的吐温-20；

所述5×SSC含有0.75 M的NaCl和0.075 M的柠檬酸钠。

2.权利要求1所述免预杂交的Northern blot杂交液的配置方法，其特征在于，所述配置方法包括：先用无菌水溶解Na₂HPO₄，调节pH值为7.4后，再分别加入其他组分充分溶解，即得。

3.根据权利要求2所述的配置方法，其特征在于，所述配置方法包括：先用200 mL无菌水溶解2.84 g Na₂HPO₄，经磷酸盐调pH值为7.4后，再分别加入250 mL 20×SSC、70 g SDS、0.2 g聚乙烯吡咯烷酮、0.2 g聚蔗糖400、0.2 g BSA、和5 mL吐温-20，充分溶解后，定容至1L，即得；

所述20×SSC的pH值为7.4，含有3 M的NaCl和0.3 M的柠檬酸钠。

4.一种用于制备免预杂交的Northern blot杂交液的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的免预杂交的Northern blot杂交液。

5.权利要求1所述免预杂交的Northern blot杂交液或权利要求4所述试剂盒在Northern blot中的应用，其特征在于，在进行Northern blot时，无需进行预杂交步骤。

6.Northern blot中探针与RNA杂交的方法，其特征在于，包括：将探针和权利要求1所述免预杂交的Northern blot杂交液加入到交联RNA的尼龙膜中，使探针与尼龙膜上RNA进行杂交。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述杂交的温度为50 ℃，杂交的时间为3-16 h。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述杂交的时间为10-16 h。

9.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述探针与免预杂交的Northernblot杂交液的体积比为1 ul：1 mL。