[发明专利]一种猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的纯化浓缩方法

说明书

本发明公开一种猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的纯化浓缩方法，属于病毒疫苗制备技术领域。提供的方法采用深层过滤和切向流过滤纯化浓缩相结合的方式对SADS‑CoV抗原进行纯化浓缩，两者共同作用，使得SADS‑CoV抗原的浓缩倍数可达10倍以上，并且抗原回收率高，可达100％左右，蛋白去除率在98％以上，可以为制备高质量的SADS‑CoV病毒疫苗提供高质量的病毒抗原原料。

技术领域

本发明属于病毒疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的纯化浓缩方法及其在猪急性腹泻综合征冠状病毒疫苗制备中的应用。

背景技术

猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus，SADS-CoV)属于冠状病毒科α冠状病毒属，是有囊膜包被的单股正链RNA病毒，基因组全长27Kb，有五个非结构蛋白ORF1a、ORF1b、NS3a、NS7a、NS7b和四个结构蛋白S、E、M、N。猪急性腹泻综合征的临床症状与其他已知的猪肠道冠状病毒引起的临床症状非常相似：包括严重且急性呕吐和腹泻、新生仔猪体重迅速减轻、导致急性死亡等。该病可感染各种年龄的猪，但对新生仔猪的影响最为严重，在5d或者更小日龄仔猪中，死亡率高达90％，发病后3-6天死亡，感染成年母猪只有轻度腹泻症状，2天内即可恢复。

由于SADS-CoV常与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)等引起腹泻症状的病毒存在混合感染，且市场上没有商品化的检测试剂盒以及有效的针对SADS-CoV病毒感染的药物可用，一旦SADS-CoV病毒大面积爆发，将会对养猪业带来巨大的经济损失。因此研发针对SADS-CoV的疫苗药物对做好疫情防控准备至关重要。

灭活疫苗相比活疫苗具有安全性高，更适合猪场净化等优点，因此，研制SADS-CoV的灭活疫苗是预防该病毒大规模爆发的有效途径之一，然而，灭活疫苗的制备需要高含量的病毒抗原，即需要对培养获得的病毒液进行纯化浓缩，但由于SADS-CoV是一种新发现的病毒，目前现有技术中还没有针对该病毒抗原的纯化浓缩方法可用，阻碍了SADS-CoV病毒灭活疫苗的研制进程。

发明内容

针对现有技术中存在的一个或多个问题，本发明的一个方面提供一种猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的纯化浓缩方法，其包括对猪急性腹泻综合征冠状病毒液进行深层过滤预处理，和对预处理后的病毒液进行切向流过滤纯化浓缩处理，使得处理过程中病毒抗原基本不损失(病毒抗原损失率小于10％，可选为损失率小于5％，进一步可选为损失率小于2％)，且基本上去除所有蛋白(蛋白去除率为98％以上)，且基本上去除所有蛋白(蛋白去除率为98％以上)。

在一些实施方式中，所述深层过滤预处理可为采用深层过滤滤膜对所述猪急性腹泻综合征冠状病毒液进行滤过处理，其中所述深层过滤滤膜的孔径可为0.65μm-1.2μm。

在一些实施方式中，所述切向流过滤纯化浓缩处理可采用中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统对所述预处理后的病毒液进行纯化浓缩处理。

在一些实施方式中，所述对预处理后的病毒液进行切向流过滤纯化浓缩处理的操作可包括：

S1：将所述预处理后的病毒液置于所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统中进行切向流过滤纯化浓缩处理，控制进口压力≤0.1MPa，控制透过端流速为1-3L/min，控制跨膜压差≤0.1MPa；

S2：当浓缩至预定倍数时，使用磷酸盐缓冲液进行洗滤；

S3：洗滤结束后，使用预定量的磷酸盐缓冲液流经所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统收集纯化浓缩后的病毒液。