[发明专利]一种猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的纯化浓缩方法

权利要求书

1.一种猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的纯化浓缩方法，其包括对猪急性腹泻综合征冠状病毒液进行深层过滤预处理，和对预处理后的病毒液进行切向流过滤纯化浓缩处理，使得处理过程中病毒抗原基本不损失(病毒抗原损失率小于10％，可选为损失率小于5％，进一步可选为损失率小于2％)，且基本上去除所有蛋白(蛋白去除率为98％以上)。

2.根据权利要求1所述的纯化浓缩方法，其中，所述深层过滤预处理为采用深层过滤滤膜对所述猪急性腹泻综合征冠状病毒液进行滤过处理，其中所述深层过滤滤膜的孔径为0.65μm-1.2μm。

3.根据权利要求1或2所述的纯化浓缩方法，其中，所述切向流过滤纯化浓缩处理采用中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统对所述预处理后的病毒液进行纯化浓缩处理。

4.根据权利要求3所述的纯化浓缩方法，其中，所述对预处理后的病毒液进行切向流过滤纯化浓缩处理的操作包括：

S1：将所述预处理后的病毒液置于所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统中进行切向流过滤纯化浓缩处理，控制进口压力≤0.1MPa，控制透过端流速为1-3L/min，控制跨膜压差≤0.1MPa；

S2：当浓缩至预定倍数时，使用磷酸盐缓冲液进行洗滤；

S3：洗滤结束后，使用预定量的磷酸盐缓冲液流经所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统收集纯化浓缩后的病毒液。

5.根据权利要求3或4所述的纯化浓缩方法，其中，所述中空纤维浓缩系统或超滤膜包系统的截留猪急性腹泻综合征冠状病毒抗原的孔径为100-300KD，使得10倍或10倍以上浓缩液中病毒抗原的含量为10^8.75TCID₅₀/ml以上(可选为10^9.00TCID₅₀/ml以上)或20μg/ml以上，且蛋白的含量为250μg/ml以下(可选为220μg/ml以下)。

6.根据权利要求4或5所述的纯化浓缩方法，其中，步骤S2中所述磷酸盐缓冲液的流速为1-3L/min。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的纯化浓缩方法，其中，所述猪急性腹泻综合征冠状病毒液为培养猪急性腹泻综合征冠状病毒所收获的病毒上清液，或经灭活后的猪急性腹泻综合征冠状病毒液。

8.一种猪急性腹泻综合征冠状病毒的纯化浓缩液，其由权利要求1-7中任一项所述的方法制备，其中浓缩10倍或以上的猪急性腹泻综合征冠状病毒的纯化浓缩液中蛋白的含量为250μg/ml以下(可选为220μg/ml以下)，病毒抗原的含量为10^8.75TCID₅₀/ml以上(可选为10^9.00TCID₅₀/ml以上)或20μg/ml以上。

9.一种猪急性腹泻综合征冠状病毒灭活疫苗的制备方法，其包括将权利要求8所述的猪急性腹泻综合征冠状病毒的纯化浓缩液与免疫佐剂混合。

10.一种猪急性腹泻综合征冠状病毒灭活疫苗，其由权利要求9所述的制备方法获得。