[发明专利]一种利用16srDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法

说明书

本发明公开了一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，包括如下步骤：S1.取多个健康人的粪便组织，对粪便组织细菌进行定量检测、测序，分门统计拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的占比数据；S2.取患者的粪便组织，对粪便组织细菌进行定量检测、测序，分门统计拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的占比数据；S3.将步骤S2获得的患者数据与步骤S1获得的健康人群数据进行对比，得出检测结果。本发明采用16SrDNA测序技术，检测肠道菌群，将检测结果与正常健康患者的肠道菌群检测结果对比，辅助判断哮喘病和哮喘类型，准确率较高，具有极大的辅助诊断参考价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法。

背景技术

哮喘这一疾病以持续性慢性气道炎症为主要特征，使气道呈高反应状态，接触诱因时更容易反复发生哮喘症状。根据2018年的Global Initiative for Asthma(GINA)统计数据，全球哮喘的流行性在不同国家约占各国人口总数的1％-16％。全球疾病负担研究组织指出，哮喘疾病每年导致约1380万生命的伤残，约占全球疾病负担的1.8％。哮喘疾病导致全球每年34万6千例死亡。

哮喘分为支气管哮喘、激素依赖型或者激素抵抗型哮喘、妊娠哮喘和运动性哮喘等几种类型。而哮喘的症状与心源性哮喘、喘息型慢性支气管炎和支气管肺癌等疾病的症状极为类似，均表现出反复发作的喘息，气促、胸闷和咳嗽等症状。不同类型的疾病，治疗方式有极大的区别，不同类型的哮喘病，采用的治疗方案也有很大差异。因此，准确诊断哮喘疾病，判断哮喘疾病类型是治疗哮喘病的关键。目前临床上对于哮喘的诊断主要以医生经验判断，或者试探性治疗判断，亦或者进行支气管舒张实验、支气管激发试验判断等方式诊断。但是上述诊断方式难以精确判断哮喘病和哮喘类型。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，采用16SrDNA测序技术，检测肠道菌群，将检测结果与正常健康患者的肠道菌群检测结果对比，辅助判断哮喘病和哮喘类型，准确率较高，具有极大的辅助诊断参考价值。

为解决上述问题，本发明的技术方案如下：本发明保护一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，包括如下步骤：

S1.制备健康人群肠道菌群数据：取多个健康人的粪便组织，对粪便组织细菌16SrRNA的V3-V4区域PCR扩增，并对扩增产物进行定量检测、测序，分门统计拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的占比数据；

S2.检测患者肠道菌群数据：取患者的粪便组织，对粪便组织细菌进行16SrRNA的V3-V4区域PCR扩增，并对扩增产物进行定量检测、测序，分门统计拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的占比数据；

S3.对比判断：将步骤S2获得的患者数据与步骤S1获得的健康人群数据进行对比，分别比对四类细菌群落占比差异，判断患者的拟杆菌门和脱铁杆菌门占比是否增加，厚壁菌门和变形菌门占比是否降低，如果符合则患者较大概率患有支气管哮喘，不符合则患者患有支气管哮喘的概率较低。

在上述技术方案的基础上，本发明还有如下改进。

进一步，所述步骤S1和S2中，取粪便组织，对粪便组织细菌16SrRNA的V3-V4区域PCR扩增的具体步骤为：首先，提取粪便组织的基因组总DNA；然后，使用1％琼脂糖凝胶电泳和超微量分光光度计检测抽提基因组DNA；最后，对细菌16SrRNA的V3-V4区域进行PCR扩增。

优选的，所述PCR扩增的具体步骤为：在4μL 5×FastPfu缓冲液，2μL 2.5mMdNTPs，0.8μL 5μM正向引物，0.8μL 5μM反向引物，0.4μL FastPfu聚合酶，10ng模板DNA，0.2μL牛血清蛋白，补ddH2O至20μL中行PCR扩增，所述正向引物采用338F，所述反向引物采用806R。