[发明专利]一种利用16srDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法

权利要求书

1.一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.制备健康人群肠道菌群数据：取多个健康人的粪便组织，对粪便组织细菌16SrRNA的V3-V4区域PCR扩增，并对扩增产物进行定量检测、测序，分门统计拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的占比数据；

S2.检测患者肠道菌群数据：取患者的粪便组织，对粪便组织进行细菌16SrRNA的V3-V4区域PCR扩增，并对扩增产物进行定量检测、测序，分别统计拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的占比数据；

S3.对比判断：将步骤S2获得的患者数据与步骤S1获得的健康人群数据进行对比，分别比对四类细菌群落占比差异，判断患者的拟杆菌门和脱铁杆菌门占比是否增加，厚壁菌门和变形菌门占比是否降低，如果符合则患者较大概率患有支气管哮喘，不符合则患者患有支气管哮喘的概率较低。

2.根据权利要求1所述的一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中，取粪便组织，对粪便组织进行细菌16SrRNA的V3-V4区域PCR扩增，其具体步骤为：首先，提取粪便组织的基因组总DNA；然后，使用1％琼脂糖凝胶电泳和超微量分光光度计检测抽提基因组DNA；最后，对细菌16SrRNA的V3-V4区域进行PCR扩增。

3.根据权利要求2所述的一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述PCR扩增的具体步骤为：在4μL 5×FastPfu缓冲液，2μL 2.5mMdNTPs，0.8μL 5μM正向引物，0.8μL 5μM反向引物，0.4μL FastPfu聚合酶，10ng模板DNA，0.2μL牛血清蛋白，补ddH2O至20μL中行PCR扩增，所述正向引物采用338F，所述反向引物米用806R。

4.根据权利要求3所述的一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述扩增的具体步骤为：首先，92℃以上5min预变性；而后，95℃变性30s，55℃退火30s，75℃延伸30s，25个循环；最后，75℃延伸8min，回收PCR产物并检测。

5.根据权利要求1所述的一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中，所述定量检测采用荧光定量检测。

6.根据权利要求1所述的一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中，测序后需对测序数据进行除杂处理，以优化DNA序列。

7.根据权利要求6所述的一种利用16SrDNA检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述优化DNA序列后，需对优化序列提取非重复序列，按照97％相似性进行OTU聚类，去除嵌合体序列。

8.根据权利要求1所述的一种利用16SrDNA测序技术检测肠道菌群辅助分析支气管哮喘的方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中，分门统计采用贝叶斯算法，对比Silva 16s细菌和古细菌核糖体Silva数据库，完成分类。