[发明专利]一种制备多重活性胶原的方法

权利要求书

1.一种制备多重活性胶原的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)预处理：将动物皮片进行预处理，去除毛发和脂肪；

(2)去除杂蛋白：将预处理完成的皮片，用NaOH和/或NaCl浸泡处理；

(3)酶解：将步骤(2)处理后的皮片投入到醋酸溶液中，加入一定量的胃蛋白酶，酶解处理；

(4)梯度化反应：将步骤(3)得到的酶解溶液分成至少两份；

a.其中第一份，调节料液温度至38～42℃，匀速搅拌，待料液完全失去粘度，加入一定量的胃蛋白酶，调节料液pH值为1.8～2.2，反应温度为25～37℃，反应一段时间；反应结束，调节料液pH值至10.0～10.5，保持一段时间，再调节料液pH值至7.0～7.5，完成后，室温保存；

b.其中第二份，加入一定量的蛋白酶，升温至40～45℃，pH至4～4.5，反应一段时间；反应结束，调节料液pH值至10.0～10.5，保持一段时间，再调节料液pH值至7.0～7.5，完成后，室温保存；

c.将上述第一份和第二份得到的料液混合；

(5)压滤：将上述步骤(4)制备得到的料液，用滤布袋过滤去除残渣，再经过0.45μm和5μm滤芯过滤后，得到溶液；

(6)纳滤：用纳滤设备先将压滤后的料液浓缩，然后再洗滤脱盐；

(7)冷冻干燥：将步骤6得到的料液用冻干机冷冻干燥，得到所述多重活性胶原。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括以下步骤：将动物湿皮片用剃毛器剔除表面长毛，用剖层机剖去绒毛层和脂肪层，清洗干净后用粉碎机切成碎片，冷冻备用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，NaOH溶液的浓度为4％～8％、NaCl溶液的浓度为8％～15％、料液比为1:5～1:10、浸泡时间为0.5～4h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，胃蛋白酶的添加量为0.1％～1％；料液比为1:20～1:80；酶解pH为1.8～2.2；酶解温度为4～25℃；酶解时间为24～48h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，分成两份溶液，所述第一份溶液与所述第二份溶液的体积比为1:1～3:1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)a中，胃蛋白酶的添加量为0～0.5％，反应时间为3～8h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)b中，所述蛋白酶为菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或两种；蛋白酶的添加量为0.003％～0.1％；反应时间为2～6h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，经过2次压滤，第一次用5μm滤芯过滤，第二次用0.45μm滤芯过滤。

9.由权利要求1～8任一项所述的方法制备获得的多重活性胶原，其特征在于，所述胶原的分子量范围为1～300kDa，呈梯度分布；分子量50kDa以上的大分子胶原所占比例为25％～30％，分子量10～50kDa的中分子胶原所占比例为55％～60％，分子量10kDa以下的小分子胶原所占比例为10％～20％。

10.一种权利要求9所述的多重活性胶原在制备修复/护理皮肤的药品、保健品或者护肤品中的用途。