[发明专利]一种修饰的棒状杆菌属微生物及其应用与构建方法

权利要求书

1.一种修饰的棒状杆菌属微生物，其特征在于，所述微生物相比于未修饰的微生物，其Cgl0978基因的表达降低或丧失，且所述微生物相比于未修饰的微生物具有增强的苏氨酸生产能力。

2.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，采用诱变、定点突变或同源重组的方法来降低Cgl0978基因的表达或使其失活。

3.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，所述微生物与未修饰的微生物相比，其体内苏氨酸合成途径和/或前体供应途径相关的酶的活性增强；

其中，与所述苏氨酸合成途径和/或前体供应途径相关的酶选自天冬氨酸激酶、高丝氨酸脱氢酶、丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的微生物，其特征在于，所述微生物为如下①～④中的任一种：

①Cgl0978基因的表达降低或丧失且天冬氨酸激酶和/或高丝氨酸脱氢酶活性增强的微生物；

②Cgl0978基因的表达降低或丧失且天冬氨酸激酶、高丝氨酸脱氢酶和/或丙酮酸羧化酶活性增强的微生物；

③Cgl0978基因的表达降低或丧失且天冬氨酸激酶、高丝氨酸脱氢酶和/或磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性增强的微生物；

④Cgl0978基因的表达降低或丧失且天冬氨酸激酶、高丝氨酸脱氢酶、丙酮酸羧化酶和/或磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性增强的微生物。

5.根据权利要求3所述的微生物，其特征在于，所述微生物体内苏氨酸合成途径和/或前体供应途径相关的酶的活性的增强是由选自以下1)～5)，或任选的组合实现的：

1)通过导入具有所述酶的编码基因的质粒而增强；

2)通过增加染色体上所述酶的编码基因的拷贝数而增强；

3)通过改变染色体上所述酶的编码基因的启动子序列而增强；

4)通过将强启动子与所述酶的编码基因可操作地连接而增强；

5)通过对酶的氨基酸序列进行改变而增强。

6.根据权利要求1-4任一项所述的微生物，其特征在于，所述微生物为谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。

7.产苏氨酸菌株的构建方法，其特征在于，所述方法包括：

A、弱化或失活具有氨基酸生产能力的棒杆菌中的Cgl0978基因，获得基因弱化菌株；和/或，

B、增强步骤A基因弱化菌株中与苏氨酸合成途径和/或前体供应途径相关的酶，获得酶活增强菌株；

所述增强的途径选自以下1)～5)，或任选的组合：

1)通过导入具有所述酶的编码基因的质粒而增强；

2)通过增加染色体上所述酶的编码基因的拷贝数而增强；

3)通过改变染色体上所述酶的编码基因的启动子序列而增强；

4)通过将强启动子与所述酶的编码基因可操作地连接而增强；

5)通过对酶的氨基酸序列进行改变而增强；

其中，与所述苏氨酸合成途径和/或前体供应途径相关的酶选自天冬氨酸激酶、高丝氨酸脱氢酶、丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶中的至少一种。

8.一种生产苏氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

a)培养权利要求1-6任一项所述的微生物，以获得所述微生物的培养物；

b)从步骤a)中获得的所述培养物中收集所产生的苏氨酸。