[发明专利]一种基于原发性干燥综合征患者免疫细胞的细胞通讯分析方法

权利要求书

1.一种基于原发性干燥综合征患者免疫细胞的细胞通讯分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：分离原发性干燥综合征患者外周血中的免疫细胞，制成单细胞悬液；

S2：对步骤S1所述的单细胞悬液进行单细胞转录组测序；

S3：加载经步骤S2所述单细胞转录组测序得到的表达数据，利用分析软件导入综合性配体受体数据库，对所述表达数据进行预处理，以识别所述细胞中过表达的配体和受体之间的相互作用；推断所述表达数据中细胞状态特定的信号通讯；通过可视化输出、社交网络分析工具、模式识别方法或学习方法中的至少一种对细胞通讯进行定量表征和比较。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤S3中对所述表达数据进行预处理的方法为：先在一个细胞组中识别过表达的配体或受体，然后将所述表达数据投射到蛋白-蛋白相互作用网络上，如果所述配体或所述受体过表达，则识别过表达的所述配体和所述受体之间的相互作用。

3.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述一个细胞组包括一个表达所述配体的细胞和一个表达所述受体的细胞。

4.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，步骤S3中，推断所述表达数据中细胞状态特定的信号通讯的具体方法为：为每个所述相互作用中的配体-受体对从所述细胞组中的一个细胞到另一个细胞的通信分配一个概率值，对通信概率建立质量互作模型，通过计算与每个信号通路相关的所有配体-受体相互作用的通信概率，来推断所述每个信号通路水平上的通信概率，进而推断所述信号通路水平的细胞通讯网络，再通过计算链路的数量或汇总通信概率来计算细胞间的聚合通信网络。

5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤S3中所述的可视化输出包括单个配体-受体介导的细胞互作可视化或配体-受体层级的可视化中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的分析方法，其特征在于，所述可视化输出的形式包括细胞互作数量与强度分析统计图、层次图、网络图、和弦图或热图中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤S3所述模式识别方法包括传入模式识别和传出模式识别；

所述传入模式识别用于预测接收信号的细胞间相互协调及与一些信号通路协调以响应传入信号的方式；

所述传出模式识别用于预测信号源细胞间的相互协调及与一些信号通路协调以驱动通信的方式。

8.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤S2中首先将所述单细胞悬液、凝胶微珠和油分别加入芯片的不同小室中；所述凝胶微珠上依次连接有测序引物、barcode序列、UMI序列和多聚T序列。

9.根据权利要求8所述的分析方法，其特征在于，在加入所述单细胞悬液、所述凝胶微珠和所述油后，运行仪器，经由微流体双十字交叉系统形成油滴包裹的凝胶珠；收集所述油滴包裹的凝胶珠并混合，在所述油滴内合成cDNA，以所述cDNA为模板进行PCR扩增，对扩增产物进行末端修复、加A、接头连接，完成cDNA文库的构建。

10.根据权利要求9所述的分析方法，其特征在于，在完成所述cDNA文库的构建后，进行测序和数据分析。