[发明专利]一种耳聋基因检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种突变基因，它是人类EPS8L2基因c.429delG杂合缺失变异。还提供了检测人类EPS8L2基因c.429delG杂合缺失变异的相关试剂在制备的耳聋基因检测试剂中的用途。本发明将EPS8L2基因c.429delG杂合缺失变异应用于耳聋基因检测试剂盒的制备中，能达到临床辅助诊断的目的。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种儿童期进行性耳聋基因检测产品。

背景技术

听力障碍是人类最常见的遗传缺陷疾病之一。耳聋的病因复杂多样，涉及遗传、感染、外伤、药物应用不当、化学物质中毒及心理等诸多因素。其中60％的耳聋是由遗传因素所导致的，分为综合征型耳聋和非综合征型耳聋两大类，后者占全部遗传性耳聋的70％左右。在非综合征型耳聋中，常染色体隐性遗传(DFNB形式)占绝大多数。据HereditaryHearing Loss网站报道，迄今为止已鉴定出78个DFNB基因，其中大多数会导致先天性、中度至重度耳聋，而少数会导致儿童期延迟进行性耳聋。

EPS8L2有24个外显子，编码715个氨基酸的蛋白质，是肌动蛋白结合蛋白EPS8(表皮生长因子受体通路底物8)家族的成员。该家族包括四个成员，EPS8和三个EPS8样蛋白(EPS8L1、EPS8L2和EPS8L3)，具有部分重叠的功能。在小鼠耳中，在耳蜗和前庭毛细胞的静纤毛尖端检测到EPS8L2。Furness等人(2013)在EPS8L2基因敲除小鼠中发现其具有晚发，进行性，严重的听力障碍，特别是在较高频率下。并且发现这种表型与耳蜗毛束的逐渐紊乱以及立体纤毛的长度和宽度异常变化有关。Dahmani等人(2015)报道了2名阿尔及利亚同胞，他们是近亲父母所生，在大约4岁时就出现了听力障碍的最初迹象。到6岁时，他们出现双侧听力阈值升高，从低频(125Hz)的30分贝开始，到高频(8000Hz)稳步上升至90分贝。在10岁时，所有频率的听力阈值进一步增加。

根据已有研究报道，EPS8L2所导致的是常染色体隐性遗传耳聋106型(DFNB106)，该病的临床表现为儿童起病，进行性，双侧，感音神经性，中度至重度耳聋。基于该疾病的罕见性，且尚无有效治疗办法，通过基因检测是对该疾病进行确诊的重要手段，也是进行疾病干预的重要前提。

本发明提供一个EPS8L2基因的变异位点及其检测试剂盒，用于对儿童期进行耳聋的临床(辅助)诊断，为携带相关致病变异的家庭提供遗传阻断，达到优生优育的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与儿童期进行性耳聋相关的EPS8L2基因突变检测试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种用于检测EPS8L2基因c.429delG(p.Glu144Serfs*41)突变的试剂盒，该试剂盒包括用于扩增DNA片段的PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括PCR引物，该PCR引物扩增的目标片段包含人EPS8L2基因NM_022772：c.428_430位所对应的碱基。

优选的，所述试剂盒还包括用于从待测个体中提取PCR扩增所需的模板DNA的试剂。

优选的，所述试剂盒还包括用于对PCR扩增的目标片段进行测序的试剂。

本发明的另一目的在于使用Sanger测序法对该变异进行检测，包括如下步骤：

(1)使用经设计的引物组合对EPS8L2基因进行扩增；

(2)将扩增产物经吸附柱进行纯化；

(3)纯化后的PCR产物进行Sanger测序；

(4)测序结果分析。

具体地，所述步骤(1)中采用的PCR扩增引物序列如下