[发明专利]一种仿刺参中海参脑苷脂的分离提取方法

说明书

本发明公开了一种仿刺参中海参脑苷脂的分离方法，属于生物分离技术领域。通过80％乙醇多次回流提取和硅胶柱的分离纯化得到的，其操作较为简单，成本较低，得到纯度较高的1个单体化合物，对进一步研究仿刺参中海参脑苷脂的生理合成具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种仿刺参中海参脑苷脂的分离方法，属于生物分离技术领域。

背景技术

仿刺参作为一种功能性食品，含有丰富的生物活性物质，海参脑苷脂是存在于海参体壁中结构独特的鞘脂类化合物。研究表明，海参脑苷脂具有抗肿瘤和神经保护作用，能够改善阿尔茨海默病，调节糖代谢和脂质代谢，改善机体的能量代谢。海参脑苷脂主要分为葡萄糖脑苷脂和半乳糖脑苷脂两类。本发明主要提取的是葡萄糖脑苷脂，是海参中含量最高的鞘脂类化合物。海参脑苷脂活性作用温和，毒副作用小。具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种活性。徐杰(海参脑苷脂的分离纯化、结构分析及其生物活性研究[D],中国海洋大学，博士论文)对分离得到的脑苷脂(acaudina molpadioides cerebrosides-2，AMC-2)进行活性研究，发现AMC-2使大鼠肝中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平，硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-coenzyme A desaturase，SCD)的活性降低，m RNA的表达明显减少，这表明AMC-2能通过抑制SCD活动和脂肪细胞的生物合成来改善大鼠的非酒精性脂肪肝。杜磊(海参和海星脑苷脂抗肿瘤及改善癌症恶病质作用的研究[D],中国海洋大学，硕士论文)研究了海参中脑苷脂的抗肿瘤活性，结果表明：脑苷脂Acaudina molpadioides cerebrosides(AMC)和Asterias amurensis cerebrosides(AAC)能通过诱导S180细胞的凋亡抑制细胞增殖，在体外和体内通过诱导线粒体介导细胞凋亡而表现出抗肿瘤活性。

海参脑苷脂鞘脂类的结构并不复杂，但因为多个手性碳的存在、长链碱和长链脂肪酸的链长不定，以及双键的数目、位置不同，给其结构鉴定带来了一定的复杂性。本发明提供了一种仿刺参中海参脑苷脂的分离方法，得到单体化合物，明确其结构，为进一步研究海参保健品提供技术支持。

发明内容

为解决现有技术的问题，本发明提供一种仿刺参中海参脑苷脂的分离方法，得到单体化合物，明确其结构，为进一步研究海参保健品提供技术支持。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种仿刺参中海参脑苷脂的分离方法，包括如下步骤：

(1)选取新鲜仿刺参经解剖去肠后粉碎，得到糜肉，向其中加入80％的乙醇水溶液进行回流提取，提取3次，提取时间分别为2小时、1.5小时和0.5小时，提取液回收，进行浓缩，得浓缩浸膏为总提取物。

(2)将步骤(1)中得到的总提取物，均匀分散在水中，通过正丁醇进行萃取，对正丁醇萃取液进行回收浓缩，得正丁醇浸膏。

(3)将步骤(2)中得到的提取物通过正相硅胶柱层析,以不同比例氯仿、甲醇和水作为洗脱溶剂进行梯度洗脱，氯仿、甲醇和水的体积比依次为7：1：0.5、6：1：0.5、6：4：0.5、6：5：0.5、4：1：0.5、2.5：1：0.5；洗脱物再经过薄层色谱分析，选取含量大的部分通过凝胶色谱柱先以氯仿和甲醇作为洗脱溶剂，氯仿：甲醇的体积比为1：1，再以甲醇和水作为洗脱溶剂，甲醇和水的体积比为1：1，继续洗脱；之后将洗脱物通过反向硅胶柱层析以体积比为2:1的乙腈和水作为洗脱溶剂进行纯化，得到海参脑苷脂。

进一步地，上述技术方案中，步骤(1)中，所述糜肉与80％的乙醇水溶液的质量为1:7。

进一步地，上述技术方案中，步骤(2)中，所述浓缩的方式为：真空旋转浓缩，浓缩的温度为40℃。

进一步地，上述技术方案中，步骤(3)中，所述正相硅胶填料的粒度为200-300目；反向硅胶柱中填料的粒度为50μm。