[发明专利]SOD3在调控双氢青蒿素诱导的脾脏增大及免疫细胞异质性药物筛选或疫苗评价中的应用

说明书

本发明涉及一种SOD3在调控双氢青蒿素诱导的脾脏增大及免疫细胞异质性药物筛选或疫苗评价中的应用；本发明的意义在于：双氢青蒿素可调控脾脏免疫细胞的异质性。SOD3^‑/‑小鼠用等量的双氢青蒿素进行灌胃处理后未发现脾脏增大，脾指数也未升高。流式细胞分析发现SOD3^‑/‑小鼠脾脏免疫细胞亚群中CD11b⁺Gr‑1⁺中性粒细胞和B220+B细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞的比例也未发生显著变化。因此，SOD3蛋白缺失在逆转双氢青蒿素诱导的脾增大及免疫细胞异质性方面有一定的作用，验证SOD3是双氢青蒿素作用的靶点之一。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，主要涉及到SOD3蛋白缺失在缓解双氢青蒿素诱导的脾增大及免疫细胞异质性方面的应用。

背景技术

双氢青蒿素(DHA)，作为青蒿素的一种衍生物谢物，比青蒿素本身表现出更强的抗疟疾作用，同时也被公认为是一种免疫调节剂。研究表明，高浓度的双氢青蒿素可以抑制体液免疫反应，此外，双氢青蒿素还可以抑制氧化应激以及活性氧(ROS)积累以改善炎症。而作为主要的抗氧化酶，超氧化物歧化酶(SOD) 在清除ROS中起着至关重要的作用。大多数哺乳动物细胞含有三种形式的 SOD，即SOD1、SOD2和SOD3，它们在细胞中有不同的定位：SOD1主要存在于细胞质和线粒体内膜间隙；SOD2主要分布在线粒体基质和内膜；SOD3在信号肽的引导下定位与细胞外间隙。在细胞外环境中，SOD3催化超氧阴离子的歧化，阻止O^2-的形成，所以，SOD3在双氢青蒿素调控的免疫反应中是否发挥重要作用，是本领域技术人员一直渴望解决的技术难题。

发明内容

本发明针对上述现有技术中存在的问题，目的在于提供SOD3蛋白缺失在缓解双氢青蒿素诱导的脾增大及免疫细胞异质性方面的应用。

本发明的技术方案如下：

SOD3在调控双氢青蒿素诱导的脾脏增大及免疫细胞异质性药物筛选或疫苗评价中的应用。

所述的双氢青蒿素在调控脾脏增大及免疫细胞异质性的检测方法，包括如下步骤：

步骤1，将0.1g羧甲基纤维素钠(CMC-Na)加入到20mL加热至100℃的蒸馏水中，在磁力搅拌器中搅拌3-5h，当温度恢复至室温时，加入0.2g双氢青蒿素(DHA)，4℃避光连续搅拌10-12h，得到双氢青蒿素溶液；

步骤2，给小鼠连续灌胃100mg/kg/d双氢青蒿素溶液26天后，取小鼠脾脏；

步骤3，将小鼠脾脏置于70μm的细胞筛上，细胞筛下面放置一个50mL的离心管，用注射器尾部带棱面研磨，同时加入预冷PBS冲洗，收集细胞悬液于 15mL的离心管中；

步骤4，上述步骤3中的细胞悬液1500rpm/min离心5min，吸去上清，留沉淀，用红细胞裂解液裂解红细胞，混匀后冰上静止3min；

步骤5，上述步骤4中裂解红细胞后的细胞悬液1500rpm/min离心5min，吸去上清，留沉淀，加入预冷5mL PBS重悬，洗涤3遍，从而制备双氢青蒿素诱导的免疫细胞亚群悬浊液；

步骤6，使用荧光显微镜及血球计数板计算小鼠脾脏免疫细胞数量；

步骤7，使用流式细胞术及单细胞转录组测序方法测定双氢青蒿素诱导的免疫细胞亚群的异质性。

所述的小鼠选体重18-20g的健康雌性BALB/c小鼠，所有小鼠均饲养于无特定微生物的小动物房中，保持黑暗12小时和光照12小时。

所述的步骤4中，红细胞裂解液为155mM NH 4Cl，10mM KHCO3，0.11mM EDTA.Na2，pH 7.2。