[发明专利]一种肌酐竞争抗原及其制备方法以及检测肌酐竞争抗原稳定性的方法

说明书

本发明提供了一种肌酐竞争抗原及其制备方法以及检测肌酐竞争抗原稳定性的方法，包括具有式(Ⅳ)所示的结构式：其中，R为‑(CH2)n‑CO‑NH‑，n为4‑20之间的整数，且载体为具有免疫原性的蛋白；肌酐竞争抗原的制备方法，包括：制备肌酐衍生物；以及将所述肌酐衍生物与载体连接，得到所述肌酐竞争抗原。本发明克服了现有技术的不足，设计合理，结构紧凑，制备肌酐竞争抗原的方法步骤简单，制备效率高，同时通过测试，肌酐衍生物与载体的偶联效率较高，且不易脱落，便于后期探索应用。

技术领域

本发明涉及肌酐衍生物制备技术领域，具体涉及一种肌酐竞争抗原及其制备方法以及检测肌酐竞争抗原稳定性的方法。

背景技术

肌酐是一种低分子量的含氮化合物，是人体内肌酸代谢的终产物。肌酐是临床常规肾功能指标之一，临床上主要用于严重肾小球病变引起的肾功能不全、肾炎、尿毒症等肾脏疾病的诊断和疗效观察等。血清肌酐升高意味着肾功能的损害，是了解肾脏功能的重要指标，同时对冠状动脉病变程度、高血压、糖尿病等有可靠的诊断价值；尿肌酐排出量可作为肌肉量的指标，肌酐的产生量比较恒定，当肾功能损伤不严重时，尿中肌酐的排泄量少受尿液浓缩和稀释的影响，故尿中肌酐浓度的测定常用作尿中其他物质排泄浓度的参照物。肌酐作为重要的肾功能指标，其含量检测为体外诊断，与供体无接触，无不良、致死报告，操作简单、快速，可广泛应用于临床，其临床应用的安全性和可靠性已得到验证。

CN201410799524.1公布了肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗体与肌酐检测试剂盒，其特点在于肌酐衍生物具有如式(Ⅰ)示结构：

其中R为-(CH2)n-COO-,n为1至20之间的整数。肌酐免疫原通过酯键与特定载体连接，具有高免疫原性，且免疫诱导动物所产生的抗体特异性高，与肌酐的特异性结合能力强，通过均相酶免疫检测技术能够实现全自动生化分析仪上对肌酐的高通量、快速化检测。但是这种依靠酯键相连的肌酐免疫原不够稳定，容易在水溶液中水解。

2、现有技术中还有通过九步的合成，合成了一种肌酐免疫原及其制备方法以及检测肌酐免疫原稳定性的方法，该肌酐衍生物具有如式(Ⅱ)所示结构：

作者将该化合物与蛋白偶联，得到了肌酐免疫原，进行活兔免疫实验，获得了肌酐的特异性抗体，并将偶联后的蛋白作为竞争抗原，应用ELISA法制作了肌酐的检测试剂盒。但是通过该肌酐免疫原获得的抗体滴度低，进一步应用的可能性较低。同时该化合物的合成步骤较长，过程中需要NaN₃、H₂等危化品，工业化难度较大。

3、在2000年发表了文章，合成了一种肌酐免疫原及其制备方法以及检测肌酐免疫原稳定性的方法，该肌酐衍生物结构如式(Ⅲ)所示：

并将该肌酐衍生物与蛋白偶联，获得了一种肌酐免疫原，进行小鼠的活体免疫实验，获得了高特异性的肌酐抗体。文中提到，将肌酐衍生物通过化学键将亲水酰肼膜改性，作为竞争抗原，与获得的肌酐抗体以及抗IgG葡萄糖氧化酶组成肌酐检测传感器。但是这种肌酐检测传感器在使用过程中操作繁琐，等待时间较长，搭配使用的仪器不是市场常见的仪器，不利于产品上市推广。

CN201410799524.1公布的发明中，肌酐免疫原是通过酯键将肌酐衍生物和特定载体连接，通过这种方法获得的肌酐免疫原结构不稳定容易在水溶液中水解，使后续的反应效率低，造成原料的浪费，成本的提高。

通过九步合成的肌酐衍生物步骤较长，合成条件苛刻，过程中需使用NaN₃、H₂等危化品，工业化难度较大，不利于量产。且该结构与蛋白偶联后获得的肌酐免疫原在进行活兔试验后获得的抗体滴度低，不利于进一步应用。