[发明专利]一种肌酐竞争抗原及其制备方法以及检测肌酐竞争抗原稳定性的方法

权利要求书

1.一种肌酐竞争抗原，其特征在于：具有式(Ⅳ)所示的结构式：

其中，R为-(CH2)n-CO-NH-，n为4-20之间的整数，且载体为具有免疫原性的蛋白。

2.如权利要求1所述的一种肌酐竞争抗原，其特征在于：所述R为-(CH2)n-CO-NH-，优选的，n为4-10。

3.如权利要求1所述的一种肌酐竞争抗原，其特征在于：所述具有免疫原性的蛋白，包括但不限于牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、甲状腺球蛋白、酪蛋白。

4.如权利要求1所述的一种肌酐竞争抗原的制备方法，其特征在于，包括：制备肌酐衍生物；以及将所述肌酐衍生物与载体连接，得到所述肌酐竞争抗原。

5.如权利要求4所述的一种肌酐竞争抗原的制备方法，其特征在于，包括：所述肌酐衍生物的制备过程包括：

步骤S1、将肌酐与5-溴戊酸乙酯在80-95℃下反应5h，通过结晶清洗获得的结晶在KOH的甲醇溶液中除酸，在NaOH水溶液中水解酯，用硅胶柱提纯，获得肌酐衍生物CRE-C4-COOH；

步骤S2、将获得的肌酐衍生物以EDC和sulfo-NHS活化30min，在碳酸盐缓冲液中与载体蛋白偶联，反应结束后，用超滤管提纯，获得肌酐竞争抗原。

6.检验如权利要求5所述的一种肌酐竞争抗原稳定性的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤S1、通过DNBA法测试肌酐衍生物与蛋白的偶联效率；

步骤S2、将肌酐衍生物与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物加入到不同pH的缓冲液中；

步骤S3、配制pH＝8.5的碳酸盐缓冲液和pH＝5.5的2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液，分别加入定量的合成抗原，配制成抗原溶液；

步骤S4、考察4h、8h、1d、4d后将溶液用超滤离心，用DNBA法测试下清液中是否有游离的肌酐衍生物。