[发明专利]一种四种病毒的核酸检测试剂盒、引物探针组及检测方法

说明书

本发明提出了一种四种病毒的核酸检测试剂盒、引物探针组及检测方法，其中，轮状病毒的引物为序列RV‑1、RV‑2，探针为序列RV‑3；诺如病毒GI型的引物为序列NVGI‑1、NVGI‑2，探针为序列NVGI‑3；诺如病毒GII型的引物为序列NVGII‑1、NVGII‑2，探针为序列NVGII‑3；札如病毒的引物为序列SaV‑1、SaV‑2、SaV‑3和SaV‑4，探针为序列SaV‑5。本发明检测试剂盒能够同时检测轮状病毒、诺如病毒GI型、GII型、札如病毒四种致病病毒，减少了因为误判选错检测试剂消耗的时间，对疾病的快速确诊有一定的作用。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及轮状病毒、诺如病毒GI型、GII型、札如病毒四重核酸检测试剂盒、引物探针组及检测方法。

背景技术

轮状病毒、诺如病毒、札如病毒是病毒性肠胃炎中最常见的病原体。

轮状病毒（rotavirus,RV）属呼肠孤病毒科，为球型，有宽壳盖、短幅和薄边的双链RNA病毒，可引起人类和多种动物腹泻，在所有腹泻病毒中感染比列最大。其中A、B、C三组可对人有致病性，A组引起婴幼儿急性胃肠炎常导致婴幼儿重症腹泻，占整个腹泻病的1/4，在发展中国家每年约有60万婴幼儿由于轮状病毒感染引起脱水死亡。

诺如病毒（Norovirus,NV）是一组杯状病毒科的病毒，诺如病毒感染影响胃和肠道，引起胃肠炎或“胃肠流感”。诺如病毒分5个基因组(GⅠ～GⅤ)，其中只有GⅠ、GⅡ和GⅣ可以感染人，而GⅢ、GⅤ分别感染牛和鼠。我国目前最常见的诺如病毒为GⅠ、GⅡ型。感染者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血。

札如病毒(Sapovirus,SaV)属于人类杯状病毒（HuCV），能在世界范围内引起人类急性胃肠炎（AGE）的爆发和散发。近年来，SaV在世界范围内引起的非细菌性胃肠炎爆发有增加趋势。

因此，针对疫情的快速暴发、传播范围广的特点，建立灵敏度高、特异性强、检测时间短、检测成本低、操作简单方便、器材要求不高的轮状病毒、诺如病毒GI型、GII型、札如病毒检测技术，对病例的快速识别和疫情的传播控制具有非常重要的意义，对公共卫生和食品安全防控具有重要的价值。

发明内容

本发明的目的在于提出轮状病毒、诺如病毒GI型、GII型、札如病毒四重核酸检测试剂盒、引物探针组及检测方法，能够同时检测轮状病毒、诺如病毒GI型、GII型、札如病毒四种致病病毒，减少了因为误判选错检测试剂消耗的时间，对疾病的快速确诊有一定的作用。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供一种轮状病毒、诺如病毒GI型、GII型、札如病毒的引物探针组，

其中，轮状病毒的引物为序列RV-1、RV-2，探针为序列RV-3；其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

诺如病毒GI型的引物为序列NVGI-1、NVGI-2，探针为序列NVGI-3；其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；

诺如病毒GII型的引物为序列NVGII-1、NVGII-2，探针为序列NVGII-3；其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；

札如病毒的引物为序列SaV-1、SaV-2、SaV-3和SaV-4，探针为序列SaV-5；其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10-12所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。