[发明专利]一种针对鸭细小病毒的核酸快速检测方法

说明书

本发明公开了一种针对鸭细小病毒的核酸快速检测方法，涉及核酸检测领域，包括如下检测方法步骤：步骤一：检测试剂和材料准备，检测试剂包括检测猪是否感染鸭细小的引物组、反应液、阴性对照组和材料，引物组包括引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6，引物组中各引物干粉1OD；反应液包括核酸反应液，核酸反应液包括具有链置换活性的DNA聚合酶、Buffer、dNTP、MgSO4、Betaine和荧光染料；阴性对照组包括不含目的基因反应液；材料包括未感染鸭细小病毒的鸭血清样本和鸭坦步苏病毒核酸样本；本发明的试剂盒可用于多个检测平台上，不仅可以用在基因快速检测仪和定量PCR仪，也可以用在其他可以提供恒定温度的设备上，如金属浴等。

技术领域

本发明涉及核酸检测领域，具体是一种针对鸭细小病毒的核酸快速检测方法。

背景技术

鸭细小病毒是细小病毒科依赖病毒属成员，1～30日龄雏番鸭最为易感，番鸭细小病毒的典型临床症状为呼吸困难、胰腺坏死、渗出性肠炎导致的腹泻等，感染番鸭的死亡率可达10％～80％，并且与日龄呈负相关，且会影响病愈番鸭的生长发育速度，使其失去经济价值。番鸭细小病毒病，该病在世界范围内呈广泛流行，由于其高发病率和高死亡率，使番鸭养殖业遭受了巨大的经济损失。MDPV是单股DNA病毒，其长度约为5.1kb。基因组两侧翼有约 440个碱基组成的末端倒置的重复序列。

目前检测鸭细小的方法有RT-PCR、荧光定量PCR、ELISA、病毒分离、病毒中和等SVV实验室诊断方法，但上述方法操作繁琐，需依赖昂贵的仪器，且耗时较长，在2h以上。环介导等温扩增技术是一种新型的核酸扩增方法，其反应过程始终维持在恒定的温度下进行。根据鸭细小病毒诊断标准，结合流行病学史、临床表现，实验室PCR核酸检测是鸭细小确诊、治疗效果和治愈的重要依据。

因此，本领域技术人员提供了一种针对鸭细小病毒的核酸快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种针对鸭细小病毒的核酸快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的目前检测鸭细小的方法有RT-PCR、荧光定量PCR、 ELISA、病毒分离、病毒中和等SVV实验室诊断方法，但上述方法操作繁琐，需依赖昂贵的仪器，且耗时较长，在2h以上。环介导等温扩增技术是一种新型的核酸扩增方法，其反应过程始终维持在恒定的温度下进行。根据鸭细小病毒诊断标准，结合流行病学史、临床表现，实验室PCR核酸检测是鸭细小确诊、治疗效果和治愈的重要依据的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种针对鸭细小病毒的核酸快速检测方法，包括：

步骤一：检测试剂和材料准备，检测试剂包括检测猪是否感染鸭细小的引物组、反应液、阴性对照组和材料，引物组包括引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6，引物组中各引物干粉1OD；反应液包括核酸反应液，核酸反应液包括具有链置换活性的DNA聚合酶、Buffer、dNTP、MgSO4、Betaine 和荧光染料；阴性对照组包括不含目的基因反应液；材料包括未感染鸭细小病毒的鸭血清样本和鸭坦步苏病毒核酸样本；

步骤二：病毒DNA提取，使用病毒DNA提取试剂盒提取样本DNA；

步骤三：引物稀释，将试剂盒中引物1和引物2稀释成40uM,引物3和引物4稀释成5uM,引物5和6稀释成20uM；

步骤四：扩增反应体系，反应浓缩液15ul，引物组6ul,模板4ul和总反应体系25ul；

步骤五：扩增曲线和溶解曲线获得，将步骤四中的反应浓缩液、引物组、模板和总反应体系25混匀，放入定量PCR仪或恒温荧光基因扩增仪，设置 65℃、30s/循环，60个循环或者65℃30分钟，通过FAM通道，每15S收集一次荧光信号，扩增结束后设置98℃-80℃的退火程序，间隔10-15秒收集一次荧光信号；可选循环完成后获得扩增曲线和溶解曲线和基因快速检测系统中获得扩增曲线和溶解曲线；