[发明专利]测量酶活性的新方法

说明书

提供了在诸酶、尤其诸多的葡聚糖蔗糖酶当中选择对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶的方法及测量其活性的方法。

技术领域

本公开涉及一种在诸酶、尤其诸多葡聚糖蔗糖酶当中选择对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶的方法及一种测量其活性的方法。

背景技术

葡聚糖蔗糖酶从糖释放葡萄糖，并且与此同时，催化葡萄糖的聚合物聚合反应，因而产生作为聚合物材料的多糖如葡聚糖或低聚糖。另外，诸如甜菊糖(stevia)(甜菊醇糖苷(steviol glycoside))、多酚等物质在底物中存在时，则葡聚糖蔗糖酶从糖释放葡萄糖，原因在于其底物专一性宽，并且随后显示出能够转移葡萄糖至甜菊糖、多酚等的转糖基活性。在这个方面，经转糖基的甜菊糖、多酚等可以具有改善的工业价值，如改善的溶解度、改善的滋味等。

葡聚糖蔗糖酶的上述活性通常通过测定还原糖(DNS)来测量，所述方法通过测量游离果糖分析多少糖水解成果糖和葡萄糖。然而，上述方法仅可以测量葡聚糖蔗糖酶对糖的水解程度，并且具有它不反映转糖基活性的问题。换言之，当使用DNS选择改进型葡聚糖蔗糖酶时，高度有可能仅选择出具有优异糖水解或葡聚糖聚合活性的葡聚糖蔗糖酶，未选出具有优异转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶。

但是，即便存在以上问题，在测量葡聚糖蔗糖酶活性方面尚无除DNS之外的方法，并且仍需要开发测量葡聚糖蔗糖酶活性的新方法。

发明概述

技术问题

本发明人已经开发了通过测量在借助葡聚糖蔗糖酶进行糖水解反应后游离葡萄糖的量与糖水解反应和转糖基反应后游离葡萄糖的量之间的差异，迅速且高效选择或改进对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶的高速选择方法，因而完成本公开。

技术方案

本公开提供一种选择对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶的方法，所述方法包括步骤：(i)通过使糖与葡聚糖蔗糖酶反应，确定游离葡萄糖的量；(ii)通过使糖和葡萄糖接纳体的混合物与葡聚糖蔗糖酶反应，确定游离葡萄糖的量；和(iii)比较(i)的游离葡萄糖量与(ii)的游离葡萄糖量。

有益效果

本公开的方法可以用来通过测量在葡聚糖蔗糖酶进行糖水解反应后游离葡萄糖的量与糖水解反应和转糖基反应后游离葡萄糖的量之间的差异，分析对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶的活性，因而迅速且高效地选择或改进对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的具有优异葡聚糖蔗糖酶活性的酶。

附图简述

图1显示如相对于对照酶所测量，糖水解反应后游离葡萄糖的量、糖水解反应和转糖基反应后游离葡萄糖的量、以及二者之间的差异；

图2显示如相对于实验酶所测量，糖水解反应后游离葡萄糖的量、糖水解反应和转糖基反应后游离葡萄糖的量、以及二者之间的差异；和

图3显示根据对照和实验酶的浓度的转糖基模式。

发明描述

本公开将如下详述。同时，本公开中所披露的每种描述和实施方案也可以适用于其他描述和实施方案。即，本公开中所披露的多种要素的全部组合均落于本公开的范围内。进一步地，本公开的适用范围不受下述具体描述限制。

本公开的一个方面提供一种选择对葡萄糖接纳体具有转糖基活性的葡聚糖蔗糖酶的方法，所述方法包括步骤：(i)通过使糖与葡聚糖蔗糖酶反应，确定游离葡萄糖的量；(ii)通过使糖和葡萄糖接纳体的混合物与葡聚糖蔗糖酶反应，确定游离葡萄糖的量；和(iii)比较(i)的游离葡萄糖量与(ii)的游离葡萄糖量。