[发明专利]一种R-3-羟基丁酸乙酯微生物发酵制备方法在审
| 申请号： | 202111676147.9 | 申请日： | 2021-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN114277068A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 沈宏伟;孙磊;张恒文;吕金艳;银会娟;何世琪 | 申请（专利权）人： | 珠海麦得发生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P7/625 | 分类号： | C12P7/625;C12N1/21;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/55;C12R1/01 |
| 代理公司： | 深圳智趣知识产权代理事务所(普通合伙) 44486 | 代理人： | 崔艳峥 |
| 地址： | 519031 广东省珠海市横琴新区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 羟基 丁酸 微生物 发酵 制备 方法 | ||
1.一种R-3-羟基丁酸乙酯微生物发酵制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：敲除Halomonas lutescens MDF-9中的聚3-羟基丁酸酯聚合酶基因，敲除后的聚3-羟基丁酸酯聚合酶基因失去聚合生成聚3-羟基丁酸的的功能，仍保留脱去辅酶A的功能，得到敲除菌株；
S2：采用基因工程技术构建β-酮硫解酶和乙酰乙酰辅酶A还原酶的表达载体并导入S1得到的敲除菌株中，得到工程菌；
S3：将S2得到的工程菌进行发酵，在发酵过程中同时使用萃取剂进行原位萃取，使发酵得到的3-羟基丁酸乙酯直接进入萃取相；
S4：提取产物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Halomonas lutescens MDF-9的保藏编号为GDMCC NO.61850。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4采用间歇共沸精馏法分离萃取剂和3-羟基丁酸乙酯，得到最终产物3-羟基丁酸乙酯。
4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述萃取剂为中长链烷烃。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述萃取剂为正十二烷、正十四烷、乙酸乙酯中的任意一种。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括如下步骤：
(1)平板种子培养：菌种活化；
(2)摇瓶种子培养；
(3)溶氧和pH电极校正；
(4)发酵参数的设定；
(5)接种；
(6)发酵过程控制。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中发酵罐温度控制在35-40℃。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中调节pH为7.5-9.5。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中控制溶氧为35-80％。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中控制发酵罐温度37±1℃，pH 8.5±1。
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