[发明专利]抗氧化短肽M5、其制备方法及应用

说明书

本发明公开了抗氧化短肽M5、其制备方法及应用，属于生物医药技术领域，抗氧化短肽M5，抗氧化短肽M5为直链小肽，含有9个氨基酸残基，全序列一级结构为：苯丙氨酸‑亮氨酸‑脯氨酸‑甘氨酸‑酪氨酸‑谷氨酸‑半胱氨酸‑缬氨酸‑色氨酸。抗氧化短肽M5的制备方法，包括以下步骤：S1：根据短肽的氨基酸序列合成得到粗多肽，S2：将合成得到的粗多肽进行层析脱盐纯化，得到纯化后的多肽，S3：通过质谱确定纯化后的多肽的分子量，S4：测定纯化后的多肽的氨基酸序列结构。本发明的抗氧化短肽M5、其制备方法及应用，抗氧化短肽M5具有分子量小、结构简单、溶血活性低、细胞毒性极低的优点，具有极强的抗氧化活性，且制备方法简单。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种抗氧化短肽M5、其制备方法及应用。

背景技术

自由基是具有强氧化活性的一组物质，极易发生反应。活性氧自由基不仅会使人体内的脂质与蛋白质发生链式氧化反应导致细胞膜、组织、酶和基因受损,对肌体造成了损害和衰老，而且会促使有关的基因突变，诱发相关的疾病，如动脉硬化症、高血压、类风湿性关节炎、白内障、老年痴呆症、帕金森氏病以及神经退行性病变等。越来越多的医学研究及临床试验证据显示，体内自由基含量越高寿命越短，自由基可谓“万病之源”。

近年来抗氧化在化妆品领域的应用中很广泛。由于皮肤的光老化作用是由于紫外线诱导皮肤细胞产生大量的氧自由基堆积而造成的。现在许多护肤品中加入抗氧化剂,有减少雀斑、防辐射、延缓衰老、调节免疫和提高皮肤自我保护的作用。此外食品中营养成分的氧化反应会产生过氧化物。过氧化物影响食品的营养价值，甚至严重还可导致疾病发生，寻找安全的抗氧化剂以抑制过氧化物产生一直是生化营养学的研究热点。

目前，化工领域常用抗氧化剂多为化学合成物，如BHA、BHT等，虽抗氧化效果良好，但对人体肝、脾、肺有蓄积性致癌作用。临床上常见的抗氧化剂如维生素C、维生素E与谷胱甘肽等。维生素C主要以清除·OH为主，但需大剂量使用才能达到目的，但同时，大剂量维生素C使用容易导致酸中毒；维生素E主要通过抑制细胞膜上的脂质过氧化来达到抗氧化的目的，但长期是用则有潜在的致突变风险。而临床还原型谷胱甘肽的产业化壁垒较高,已被日本协和发酵工业株式会社几乎垄断全球谷胱甘肽的供应,每公斤高达8000美金。同时，现在国内制药企业所用的谷胱甘肽制药原料还不能摆脱进口，谷胱甘肽价格一直居高不下。可见，活性佳、易合成、产量高的新型抗氧化肽已在医疗、食品、化妆品、保健品等领域中亟待开发。

发明内容

本发明的目的在于提出一种抗氧化短肽M5、其制备方法及应用，抗氧化短肽M5具有分子量小、结构简单、溶血活性低、细胞毒性极低的优点，具有极强的抗氧化活性，且制备方法简单。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供的抗氧化短肽M5，抗氧化短肽M5为直链小肽，含有9个氨基酸残基，全序列一级结构为：苯丙氨酸-亮氨酸-脯氨酸-甘氨酸-酪氨酸-谷氨酸-半胱氨酸-缬氨酸-色氨酸。

优选地，抗氧化短肽M5的分子量为1113.3Da，等电点为4.0。

本发明还提供一种抗氧化短肽M5的制备方法，包括以下步骤：

S1：根据短肽的氨基酸序列合成得到粗多肽；

S2：将合成得到的粗多肽进行层析脱盐纯化，得到纯化后的多肽；

S3：通过质谱确定纯化后的多肽的分子量；

S4：测定纯化后的多肽的氨基酸序列结构。

优选地，步骤S2中，采用RP-HPLC C18柱进行层析脱盐纯化，得到纯化后的多肽后，通过RP-HPLC鉴定纯化后的多肽的纯度，纯度≥95％。

优选地，步骤S3具体包括：使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱确定纯化后的多肽的分子量。