[发明专利]一种人源细胞制剂静脉输入动物体内脏器组织分布的检测方法

说明书

本发明公开了一种人源细胞制剂静脉输入动物体内脏器组织分布的检测方法，依赖于对人源细胞内线粒体DNA具有特异性的引物，采用实时定量PCR法，对试验中采集的实验性动物外周血、脏器组织样本进行人源细胞制剂DNA浓度的检测。用来示踪动物体内植入的人源细胞的定向分布，是一种在动物实验时，兼具安全性，灵敏度，特异性，长久性等优点于一身的人源细胞药物安全性评价所用的细胞分布检测方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人源细胞制剂静脉输入动物体内脏器组织分布的检测方法。

背景技术

近年来，多种干细胞(如人脐带间充质干细胞，UC-MSCs)因其组织细胞再生修复能力，在诸多疾病，如心肌损伤、肺损伤、肝脏疾病、骨关节炎、糖尿病及其并发症等治疗中的应用引起了人们的广泛关注。在药物研发过程中，研究药物在体内的代谢和运动是必须包括的项目，为了研究细胞药物在体内的代谢和运动，必须通过动物试验，将人源细胞移植到实验动物体内并进行示踪。人源细胞在移植后，可能随血流或通过其他途径从移植位点迁移致其他器官或组织，所以检测方法必须可以检测实验动物包括血液在内的不同器官和组织内的人源细胞。然而，评价细胞植入、分布、存活、迁移、分化和功能的干细胞标记示踪研究明显滞后于整体功能改善的观察，成为干细胞治疗机制探讨的瓶颈因素和新的研究热点。

目前的检测手段包括非侵入式和侵入式两大类。非侵入式检测主要靠活体成像技术(in vivo imaging system,IVIS)(如利用荧光体外标记细胞)或其他标记(如同位素标记、转基因及磁性离子等)，然后在体内追踪细胞制剂，来判断细胞制剂的存活以及命运，从而在整体水平上定性地反映细胞制剂在体内的分布。利用该方法，首先需要对进入体内的细胞制剂进行标记或修饰，操作复杂，过程繁琐，并且一些标记手段会对细胞制剂的活性以及体内清除率有所影响。侵入式检测主要靠收集体液或组织样本，提取组织或体液样本总DNA，通过定量PCR(Q-PCR)或半定量PCR法检测DNA样本中人体细胞染色体DNA上看家基因(如β-actin、globin、GAPDH等基因)含量，从而推算组织或体液样本中人体细胞药物含量(周进明，邹仲敏.培养小鼠骨髓间充质干细胞及其移植后在体内的定位分布[J].中华放射医学与防护杂志，2002，22(3)：167-169；邓为民，李长虹，廖联明等.成体骨髓源多能间充质干细胞体内分化皮肤干细胞和皮肤组织[J].细胞生物学杂志，2003，25(2)：98-104；DengW，Han Q，Liao L，et al.Engrafted bone marrow-derived flk-(1+)mesenchymal stemcells regenerate skin tissue.Tissue Eng,2005,11(1-2)：110-119)。该方法可以用于人体细胞药物在小鼠、大鼠等与人同源性低的动物体内分布的研究，但由于人与猴基因序列同源性高，看家基因序列基本一致，用该方法就无法区分人和猴的染色体DNA，也就无法检测猴子体内人体细胞的含量。因此该方法目前仅用于人体细胞药物在啮齿类动物体内分布情况的研究，应用范围较窄。

因此，迫切需要一种能够有效研究人体细胞药物在各种动物体内分布特点的方法，来研究人体细胞药物作为治疗药物的安全性，以解决现有技术中存在的问题。

发明内容