[发明专利]一种Tn5转座酶及其制备方法在审
| 申请号： | 202111657653.3 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114350693A | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 吴宁;张惠丹 | 申请（专利权）人： | 苏州译酶生物科技有限公司;苏州绘真生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N9/12;C07K19/00;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海九泽律师事务所 31337 | 代理人： | 蔡佳杰 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 tn5 转座酶 及其 制备 方法 | ||
1.一种Tn5转座酶，其特征在于：表达基因包括Tn5转座酶基因、内含肽基因和几丁质基因。
2.根据权利要求1所述的一种Tn5转座酶，其特征在于：所述表达基因序列如SEQ IDNO.1所示。
3.根据权利要求2所述的一种Tn5转座酶，其特征在于：所述表达基因表达的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.一种Tn5转座酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)合成含Tn5转座酶基因、内含肽基因和几丁质基因的表达基因；
(2)通过大肠杆菌表达系统获得Tn5转座酶、几丁质、内含肽的融合蛋白；
(3)几丁质亲和层析，捕获Tn5转座酶、几丁质、内含肽的融合蛋白；
(4)采用DTT切断内含肽，剔除几丁质标签，得到粗的Tn5转座酶；
(5)采用层析法对粗的Tn5转座酶进行精纯和浓缩获得Tn5转座酶。
5.如权利要求4所述的一种Tn5转座酶的制备方法，其特征在于：所述合成表达基因序列如SEQ ID NO.1所示。
6.如权利要求4所述的一种Tn5转座酶的制备方法，其特征在于：所述大肠杆菌表达系统具体步骤包括：
a、构建载体，种子培养，得到含目的基因的质粒；
b、诱导表达：将目的基因的质粒转入大肠杆菌中表达；
c、菌体富集处理，破碎大肠杆菌，得到粗酶裂解液；
d、疏水层析，去除疏水性差异大的杂质；
7.如权利要求4所述的一种Tn5转座酶的制备方法，其特征在于：所述层析法具体包括：
e、采用离子交换层析对Tn5转座酶进行精纯；
f、采用凝胶过滤层析将Tn5转座酶置换到保存液中；
g、通过超滤浓缩得到高纯度高浓度的Tn5转座酶。
8.如权利要求6所述的一种Tn5转座酶的制备方法，其特征在于，所述目的基因的质粒为pET-28a，其RBS序列如SEQ ID NO.3所示。
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