[发明专利]一种高产麦角硫因的圆红冬孢酵母重组表达菌株及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202111638611.5 | 申请日： | 2021-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN114277042A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 郭天龙;段然;祝俊;叶甘萍;刘雪倩;詹光煌;吴轶;李丹 | 申请（专利权）人： | 内蒙古金达威药业有限公司;厦门金达威集团股份有限公司;金达威生物技术（江苏）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N15/60;C12N15/81;C12N1/19;C12P17/10;C12R1/645 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 秦华 |
| 地址： | 010206 内蒙*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 麦角 圆红冬孢 酵母 重组 表达 菌株 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种高产麦角硫因的圆红冬孢酵母重组表达菌株，其特征在于，含有麦角硫因合成基因egt1和egt2，所述egt1的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，所述egt2的核苷酸序列为SEQ IDNO:9；菌株是圆红冬孢酵母菌。
2.如权利要求1所述圆红冬孢酵母重组表达菌株，其特征在于，制备方法包括：
S1，构建egt1-egt2双基因表达质粒pCambia 1301-egt1-P2A-egt2；
S2，构建egt1-egt2双基因表达菌株。
3.如权利要求2所述重组表达菌株，其特征在于，所述S1步骤中，构建egt1-egt2双基因表达质粒pCambia 1301-egt1-P2A-egt2的方法包括：
a.以粗糙脉孢菌基因组cDNA为模板，采用egt1-F和P2A-egt1-R引物扩增带有部分P2A序列的egt1基因、采用P2A-egt2-F和egt2-R引物扩增带有另一部分P2A序列的egt2基因；
b.通过重叠PCR，将扩增得到的带有部分P2A序列的egt1基因和带有另一部分P2A序列的egt2基因连接起来，得到egt1-P2A-egt2片段；
c.通过无缝克隆将egt1-P2A-egt2片段连接到已线性化的pCambia 1301质粒上，得到egt1-egt2双基因表达质粒pCambia 1301-egt1-P2A-egt2。
4.如权利要求3所述重组表达菌株，其特征在于，所述egt1-F的序列如SEQ ID NO:1所示，所述P2A-egt1-R的序列为如SEQ ID NO:6所示，所述P2A-egt2-F的序列如SEQ ID NO:7所示，所述egt2-R的序列如SEQ ID NO:8所示。
5.如权利要求2所述重组表达菌株，其特征在于，所述S2步骤中，将egt1-egt2双基因表达质粒pCambia 1301-egt1-P2A-egt2导入圆红冬孢酵母菌株中得到egt1-egt2双基因表达菌株。
6.权利要求1-5任一所述重组表达菌株用于生产麦角硫因的用途。
7.一种生产麦角硫因的方法，所述方法包括：培养权利要求1-5中任一项重组表达菌株的宿主细胞；诱导所述宿主细胞以表达编码egt1的核酸序列和编码egt2的核酸序列；收集麦角硫因。
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