[发明专利]一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记、引物、方法及应用

说明书

本发明公开了一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记及雌雄线纹海马鉴定方法，所述分子标记的序列为SEQ ID NO.1。本发明线纹海马遗传性别鉴定方法操作简便快捷，样品收集采用剪少量背鳍的方式，对线纹海马损伤小；基因组制备采用碱裂解法，DNA收获量高，对组织样品的要求低；本发明提供的性别鉴定分子标记和鉴定方法鉴定结果准确性高，且不受组织特异性和环境影响，对线纹海马性别控制和全雄苗种培育具有重要价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记、引物、方法及应用。

背景技术

海马隶属海龙科，具有独特的体形结构和“雄性育儿”繁殖策略，是极其珍贵的药源性海洋硬骨鱼类，素有“南方人参”的美誉。全球海马的交易量每年可达2000多万只，市场供不应求带来的掠夺性捕捞使海马自然资源已近枯竭，2019年已有44种海马被世界自然保护联盟IUCN录入了《濒危物种红色名录》，因此人工养殖已成为实现海马资源可持续利用的重要途径。

线纹海马(Hippocampus erectus)原产于美洲地区，由我国学者于2009年从美国引进。相较于国内传统养殖的三斑海马跟大海马，线纹海马具有生长速率快、成活率高、抗病能力强等优势。在生长过程中雄性线纹海马的个体大小和生长速率均优于雌性线纹海马，而药材市场上线纹海马的价格与其个体大小及品质成正比(元/kg)，因此，针对线纹海马开发鉴定其遗传性别的分子标记以构建全雄或高雄性比的养殖群体是提高其养殖经济效益的关键技术之一。

由于鱼类性别决定系统极其复杂，不同鱼类之间的性别特异分子标记缺乏通用性，迄今为止，有关线纹海马的性别特异分子标记尚未见报道。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记、引物、方法及应用。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记，所述分子标记的序列为SEQ ID NO.1。

进一步地，所述分子标记能够鉴别雄性线纹海马。

如上所述的分子标记在鉴别雄性线纹海马方面中的应用。

一种鉴别线纹海马遗传性别的引物，所述引物包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3，下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4。

进一步地，所述引物能够用于鉴别雄性线纹海马。

如上所述的引物在鉴别雄性线纹海马方面中的应用。

如上所述的引物的制备方法，步骤如下：

采用2b-RAD技术对线纹海马雌雄个体分别进行测序并进行雌雄特异性片段筛选，得到一个特异存在于雄性线纹海马中的短序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1；

由于雄性特异性短序列SEQ ID NO.1的长度仅为27bp，不便于PCR引物设计，因此在线纹海马基因组序列中对SEQ ID NO.1进行BLAST比对搜索并提取SEQ ID NO.1上下游各500bp的序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2；

基于序列SEQ ID NO.2，针对雄性特异性短序列SEQ ID NO.1设计一对能够分辨线纹海马性别的引物，即得该引物。

一种鉴别线纹海马遗传性别的方法，步骤如下：

(1)采用2b-RAD技术对线纹海马雌雄个体分别进行测序并进行雌雄特异性片段筛选，得到一个特异存在于雄性线纹海马中的短序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1；