[发明专利]一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记、引物、方法及应用

权利要求书

1.一种鉴别线纹海马遗传性别的分子标记，其特征在于：所述分子标记的序列为SEQID NO.1。

2.根据权利要求1所述的鉴别线纹海马遗传性别的分子标记，其特征在于：所述分子标记能够鉴别雄性线纹海马。

3.如权利要求1或2所述的分子标记在鉴别雄性线纹海马方面中的应用。

4.一种鉴别线纹海马遗传性别的引物，其特征在于：所述引物包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3，下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4。

5.根据权利要求4所述的鉴别线纹海马遗传性别的引物，其特征在于：所述引物能够用于鉴别雄性线纹海马。

6.如权利要求4或5所述的引物在鉴别雄性线纹海马方面中的应用。

7.如权利要求4或5所述的引物的制备方法，其特征在于：步骤如下：

采用2b-RAD技术对线纹海马雌雄个体分别进行测序并进行雌雄特异性片段筛选，得到一个特异存在于雄性线纹海马中的短序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1；

在线纹海马基因组序列中对SEQ ID NO.1进行BLAST比对搜索并提取SEQ ID NO.1上下游各500bp的序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2；

基于序列SEQ ID NO.2，针对雄性特异性短序列SEQ ID NO.1设计一对能够分辨线纹海马性别的引物，即得该引物。

8.一种鉴别线纹海马遗传性别的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)采用2b-RAD技术对线纹海马雌雄个体分别进行测序并进行雌雄特异性片段筛选，得到一个特异存在于雄性线纹海马中的短序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1；

(2)在线纹海马基因组序列中对SEQ ID NO.1进行BLAST比对搜索并提取SEQ ID NO.1上下游各500bp的序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2；

(3)基于序列SEQ ID NO.2，针对雄性特异性短序列SEQ ID NO.1设计一对能够分辨线纹海马性别的引物，上游引物和下游引物的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4；

(4)采用碱裂解法提取待鉴别的线纹海马背鳍组织的基因组DNA；

(5)用提取的基因组DNA为模板，以上述的上下游引物进行PCR扩增；

(6)对所得到的PCR产物用1％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，电泳结果在179bp处有一条特异性条带的个体即为雄性线纹海马，未扩增出特异性条带的个体即为雌性线纹海马。

9.如权利要求8所述的方法在鉴别线纹海马遗传性别方面中的应用。