[发明专利]一种发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法在审
| 申请号： | 202111619585.1 | 申请日： | 2021-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN114214352A | 公开（公告）日： | 2022-03-22 |
| 发明（设计）人： | 刘振云;郭涛 | 申请（专利权）人： | 黄山同兮生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/72 | 分类号： | C12N15/72;C12N15/56;C12P19/00;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙周强 |
| 地址： | 245700 安徽省*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 发酵 乳糖 大肠杆菌 基因组 优化 方法 | ||
1.一种发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，包括以下步骤：在pTargetF质粒中引入用于定位Cas9蛋白切割位点的双N20序列以及包含
2.根据权利要求1所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，设计待敲除序列的前N20序列、后N20序列，并设计包含前N20序列的引物对、包含后N20序列的引物对；再利用包含前N20序列的引物对、包含后N20序列的引物对在pTargetF质粒中引入用于定位Cas9蛋白切割位点的双N20序列。
3.根据权利要求1所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，所述调控
4.根据权利要求1所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，本底菌株为改造的大肠杆菌菌株，也可以为未改造的大肠杆菌菌株。
5.根据权利要求4所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，本底菌株为
6.根据权利要求1所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，以本底菌株的基因组为模板，分别利用HDL引物对、HDR引物对进行扩增，分别得到HDL扩增产物、HDR扩增产物；将HDL扩增产物、HDR扩增产物引入pTargetF质粒中，实现在pTargetF质粒中引入包含
7.根据权利要求1所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，其特征在于，将pCas质粒转入本底菌株感受态细胞，抗性板培养后挑选单克隆，于卡那霉素抗性LB中培养后转接，使用阿拉伯糖诱导培养，随后制备成电转感受态细胞并导入编辑质粒；培养后挑选单克隆鉴定，消除pCas与pTargetT，完成发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化。
8.根据权利要求1所述发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法得到的改造菌株。
9.利用权利要求8所述改造菌株发酵乳糖的方法，其特征在于，在发酵罐中，以所述改造菌株构建发酵菌株，再发酵乳糖，完成乳糖的发酵。
10.权利要求8所述改造菌株在发酵乳糖中的应用。
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