[发明专利]基于不同散射光纳米颗粒构建的多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器

权利要求书

1.多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器，包括AuNSs-CpHCV-MBs和AuNRs-CpHBV-MBs两种探针组合；所述AuNSs-CpHCV-MBs由金纳米球颗粒和HCV病毒捕获链以及磁珠构建而成；所述AuNRs-CpHBV-MBs由金纳米棒颗粒和HBV病毒捕获链以及磁珠构建而成。

2.根据权利要求1所述的多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器，其特征在于，两种探针组合的磁珠浓度为1.125-1.375mg/mL；金纳米球颗粒浓度为0.040-0.055nM；金纳米棒颗粒浓度为0.045-0.065nM，每种金纳米颗粒与对应的病毒捕获链的原料比率为1：300-1：500；

优选的，磁珠浓度为1.250mg/mL，金纳米球颗粒浓度为0.048nM，金纳米棒颗粒浓度为0.056nM，金纳米球颗粒与HCV病毒捕获链的原料比率为1：300，金纳米棒颗粒与HBV病毒捕获链的原料比率为1：400。

3.根据权利要求1所述的多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器，其特征在于，还包括Exo III酶，浓度为0.800-1.200U/uL，优选为1.0U/uL。

4.基于暗场成像同时检测多种肝炎病毒的方法，采用权利要求1-3任一项所述的多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器进行检测。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，检测的时间为90min以上，温度10-40℃；优选为100-120min，温度30-40℃。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，检测的样本可以为血清样本，检测的样本中HBV或HCV病毒的浓度以5-120pM为佳。

7.权利要求1-3任一项所述多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器的制备方法，包括分别制备AuNSs-CpHCV-MBs和AuNRs-CpHBV-MBs两种探针，并将两种探针混合的步骤；

所述AuNSs-CpHCV-MBs探针的制备过程包括：采用TCEP溶液对HCV病毒捕获链的末端巯基进行活化，然后将活化好的HCV病毒捕获链加入金纳米球溶液中孵育，陈化后与磁珠溶液混合并反应，洗涤后即得；

所述AuNRs-CpHBV-MBs探针的制备过程包括：采用mPEG-SH溶液对金纳米棒溶液进行处理以替换金纳米棒颗粒表面的残余离子，并采用TCEP溶液对HBV病毒捕获链的末端巯基进行活化，然后将活化好的HCV病毒捕获链加入处理后的金纳米棒溶液中孵育，陈化后与磁珠溶液混合并反应，洗涤后即得。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述mPEG-SH溶液浓度为5mg/mL，金纳米棒与mPEG-SH的用量比为c_AuNRs:c_mPEG-SH＝1:120。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，活化过程中，病毒捕获链相对于TCEP的用量比为1：100；陈化试剂采用0.1M NaCl溶液；洗涤次数为六次。