[发明专利]一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法

说明书

本发明提供了一种嗜盐乳酸菌‑海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，通过预先培养海洋细菌XS1412C菌株，将XS1412C菌株接种到发酵培养液中制备XS1412C菌株发酵培养液，再通过预先培养嗜盐乳酸菌，将嗜盐乳酸菌接种到XS1412C菌株发酵培养液中进行共生发酵培养，得到共生发酵培养液，最后离心共生发酵培养液得到含有褐藻胶裂解酶的酶液，该方法根据生物学原理，将能够发酵产生有益物质、促进菌株生长、提高菌株产酶能力的嗜盐乳酸菌与能够分泌褐藻胶裂解酶的XS1412C菌株进行共生发酵培养，既能促进褐藻胶裂解酶的分泌，保证酶的品质，有效提高酶活力，又能简化发酵过程，缩短发酵时间，降低提取成本，环保易操作，属于海洋生物技术领域。

技术领域

本发明属于海洋生物技术领域，涉及一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法。

背景技术

褐藻胶是褐藻酸的钠盐，即藻酸钠，又名海藻酸钠，是广泛存在于各种褐藻中的一类水溶性酸性多糖物质。褐藻胶具有广泛的应用价值，它是褐藻细胞壁的重要组分，具有分子质量大、高聚合度、高黏度及高纤维性等特征，因而人体吸收利用程度差，很大程度上限制了其使用范围。人们通过科学的方法将褐藻胶分解成可吸收利用的有效成分，例如通过酶促反应将其分解为小分子物质，褐藻胶寡糖就是褐藻胶的酶解主要产物，它具有免疫调节、抑菌、抗病毒能力等生物活性，在食品、药品、环保、化工领域中应用广泛，具有很高的应用价值。褐藻胶裂解酶作为生产褐藻胶寡糖的工具酶，反应效率高，反应条件温和，可控性强，便于定向制备褐藻胶寡糖，因此褐藻胶裂解酶的研究具有深远的理论意义和应用前景。

为了提高酶活力，在利用分子生物学上，最常见的是对酶进行过量异源表达，但是这种方法比较复杂，操作有一定难度，而且成本较高，不适用于工厂日常生产应用。近年来，已有研究报道，微生物能发酵生产褐藻胶裂解酶，如芽孢杆菌等，但是大部分微生物发酵生产褐藻胶裂解酶的活力低，发酵周期长，无法应用到实际工业生产中。

乳酸菌作为益生菌的重要组成，具有突出的益生特性和发酵活性，可广泛应用于食品的生产，如乳制品、肉类、蔬菜和烘焙产品等。众多研究表明乳酸菌不仅可以改善食品的感官、产生有机酸、降低食品pH、促进有益菌的生长，甚至能影响酶的表达，还对人类健康有益。在过去的几十年中，人们利用体外试验、动物模型等开展了大量关于乳酸菌的功能特性、调节宿主代谢、与宿主体内微生物组相互作用等健康功效相关研究，大量试验结果表明，乳酸菌能够调节免疫功能、降低胆固醇、促进消化、预防癌症等，将乳酸菌纳入饮食，能够带来健康益处。因此，利用乳酸菌促进褐藻胶裂解酶的生产具有良好的研究前景和应用价值。

综上所述，现有的微生物产褐藻胶裂解酶的方法存在着酶产量低、发酵周期长、生产工艺复杂、工业化成本高的技术问题，需要进一步改善。

发明内容

本申请的目的在于提供一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，旨在解决现有的微生物产褐藻胶裂解酶的方法存在着酶产量低、发酵周期长、生产工艺复杂、工业化成本高的技术问题。

本申请实施例提供了一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其包含以下步骤：

步骤(1)：海洋细菌预培养：将海洋细菌接种于培养液中进行预培养；

步骤(2)：海洋细菌发酵培养液制备：将步骤(1)中培养的海洋细菌接种于发酵培养液中进行培养，以制备海洋细菌发酵培养液；

步骤(3)：嗜盐乳酸菌预培养：将嗜盐乳酸菌接种于MRS液体培养基中进行预培养；

步骤(4)：嗜盐乳酸菌-海洋细菌共生发酵培养：将步骤(3)中培养的嗜盐乳酸菌接种于步骤(2)中制备的海洋细菌发酵培养液中，进行嗜盐乳酸菌- 海洋细菌共生发酵培养，制备共生发酵培养液；

步骤(5)：离心收集：将步骤(4)中制备的共生发酵培养液进行离心处理，收集上清液即为含有褐藻胶裂解酶的酶液。