[发明专利]GABRD甲基化作为抗海洛因复吸靶点的应用

说明书

本发明涉及一种GABRD甲基化作为抗海洛因复吸靶点的应用，与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明通过研究发现降低GABRD基因甲基化水平能够有效减少海洛因复吸行为，说明以GABRD基因甲基化作为靶点治疗海洛因复吸的药物具有重要的研发价值和开发意义。

技术领域

本发明涉及一种GABRD甲基化靶点，尤其涉及一种以GABRD甲基化作为抗海洛因复吸靶点的应用。

背景技术

阿片类药物成瘾尤其是海洛因成瘾导致巨大的医疗和经济危害。联合国毒品和犯罪问题办公室(UNODC)调查数据显示，在全球范围内，2018年全年破获毒品犯罪案件10.96万起，抓获犯罪嫌疑人13.74万名，缴获各类毒品67.9吨，海洛因成瘾人群仍然占取较大的比例，海洛因滥用形势严峻。海洛因长期激活阿片受体使阿片受体及非阿片受体系统发生代偿性适应，从而导致成瘾。长期慢性使用海洛因出现强烈的躯体依赖和精神依赖，由此产生对再次用药的强烈渴求，这种渴求是导致复吸率居高不下的主要原因。中脑腹侧被盖(VTA)到伏隔核(NAc)脑区多巴胺能系统是目前公认的药物奖赏的主要通路。NAc是大脑奖赏回路中的重要核团，伏隔核中的中型多棘神经元，会产生一种主要的中枢神经系统的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)。其中A型GABA受体δ亚型(GABRD)基因被证明与癫痫、惊厥等疾病有关，并发现该基因的甲基化可能参与可卡因等药物的成瘾和复吸。因此对海洛因成瘾干预机制的研究和药物治疗靶点的筛选，有利于促进海洛因成瘾和复吸的预防与治疗。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种以GABRD甲基化作为抗海洛因复吸靶点的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种以GABRD甲基化作为药物靶标在筛选海洛因戒断后预防复吸的药物中的应用，其特征在于：GABRD的差异甲基化区域DMR序列为：

CGGACAGCACCCGGGAGGCGGGAGAGAGGTCAGAGGGGTCCTCAGAACTGGAATAGCAGCACGCG。

进一步地，扩增GABRD的差异甲基化区域DMR序列的扩增引物和测序引物分别为：

甲基化特异性上游引物：5’-Biotin-GTGGTTAAGGGTAAGAATGAAGAGA-3’；

甲基化特异性下游引物，5’-CCCATTAAATCCACCCAATTTTACTT-3’；

甲基化特异性测序引物，5’-CCACCCAATTTTACTTT-3’。

进一步地，所述预防复吸的药物为GABRD甲基化转移酶抑制剂。

5’AZA是DNA甲基转移酶抑制剂，该药对GABRD甲基化具有抑制作用，本发明经外周注射5’AZA对海洛因自身给药大鼠消退后复吸行为的影响、中枢注射5’AZA对海洛因自身给药大鼠消退后复吸行为的影响，评价5’AZA对海洛因戒断后预防复吸的抑制作用效果；并通过中枢注射5’AZA对海洛因自身给药消退后复吸大鼠NAc脑区GABRD基因DNA甲基化及蛋白表达的变化，观察GABRD甲基化作为戒毒治疗靶点的可能性。

结果可见：外周注射5’AZA能有效抑制海洛因觅药行为的恢复、中枢注射5’AZA能有效抑制海洛因觅药行为的恢复，以上结果表明：GABRD甲基化在药物成瘾中起着重要作用，针对其设计药物有望戒除毒瘾。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明通过研究发现降低GABRD基因甲基化水平能够有效减少海洛因复吸行为，说明以GABRD基因甲基化作为靶点治疗海洛因复吸的药物具有重要的研发价值和开发意义。

附图说明

图1A为本发明的海洛因模型构建中有效鼻触和无效鼻触数记录(海洛因自身给药组Heroin组；生理盐水被动给药组Control组)；