[发明专利]一种用于检测结直肠腺瘤的标志组合物及其早期诊断试剂

说明书

本发明属于分子生物学领域，特别涉及一种用于检测结直肠进展期腺瘤的肿瘤标志物组合，以及用于结直肠进展期腺瘤早期诊断的试剂。本发明以粪便为检测样本，以目的基因DNA甲基化作为分子标志物，该目的基因甲基化为SYNPR、MEGF10、LSM2和SLC32A1基因的一种或多种，检测其甲基化水平。结果表明，所提供的用于检测SYNPR、MEGF10、LSM2和SLC32A1基因单个或联合的试剂可以很好的区分结直肠进展期腺瘤和正常人样本，可用于结直肠进展期腺瘤的筛查和早期诊断。本发明还涉及用于检测SYNPR基因、MEGF10基因、LSM2基因、SLC32A1基因甲基化的特异性引物和特异性探针。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，尤其涉及一种用于结直肠进展期 腺瘤检测的试剂及其应用，以及一种用于结直肠进展期腺瘤检测的试 剂盒。

背景技术

结直肠癌(Colorectal Cancer，CRC)，也称大肠癌，是目前常 见的恶性肿瘤。

普遍认为，CRC的发生需经过正常粘膜增生-腺瘤-腺癌的发展过 程，绝大多数的结直肠癌起源于结直肠腺瘤，从腺瘤演变为结直肠癌 需要10-15年，结直肠癌早期发现的治愈率可达90％以上，晚期癌则 为5％左右。

传统的结直肠疾病筛查主要有肠镜、大便潜血试验，这些技术均 存在一定的局限性。肠镜是结直肠癌诊断的金标准，但其侵入性强、 肠道准备繁琐，中国人结肠镜筛查的依从性偏低。便隐血(FIT)是 当前结直肠癌筛查应用最为广泛的方法，但存在假阳性率较高等缺陷。 因此，需要建立一种准确、无创、简便的结直肠进展期腺瘤早期筛查 的方法。

DNA甲基化是一种重要的基因表达调控机制，能够调节基因的 表达和沉默，具有一定的稳定性且在许多癌症中都发现存在DNA甲 基化异常的现象，与癌症的发生有着密切的关系。因此，DNA甲基 化异常可作为一种癌症诊断的生物标志物。

粪便中肿瘤脱落细胞DNA检测是一种非侵入性筛查方法，相较 于结肠镜和FIT，该技术兼具无创无痛、安全方便，灵敏度高等优势。

发明内容

本发明旨在开发一种可用于结直肠进展期腺瘤筛查的标志物组 合，可用于结直肠进展期腺瘤早期诊断试剂及方法，以实现无创、早 期诊断结直肠进展期腺瘤。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一方面，本发明提供了一种用于结直肠进展期腺瘤检 测的试剂，包含用于检测SYNPR基因、MEGF10基因、LSM2基因 和SLC32A1基因甲基化状态的试剂。

其检测对象为从人源粪便中经过基因组DNA提取后再使用亚硫 酸氢盐转化及纯化后得到的DNA样本。

本发明第二方面，本发明提供了一种用于结直肠进展期腺瘤检测 的试剂盒，所述试剂盒包括上述第一方面用于结直肠进展期腺瘤检测 的试剂。

本发明提供了SYNPR基因DNA甲基化作为分子标志物在判别 结直肠进展期腺瘤中的应用，所述目标基因位于3号染色体转录起始 区的cg09462808、cg04785972、cg06314761甲基化位点，该CpG位 点及其上下游200bp的DNA碱基序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明提供了MEGF10基因DNA甲基化作为分子标志物在判别 结直肠进展期腺瘤中的应用，所述目标基因位于5号染色体转录起始 区的cg08874609、cg04609576、cg23018092甲基化位点，该CpG位 点及其上下游200bp的DNA碱基序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明提供了LSM2基因DNA甲基化作为分子标志物在判别结 直肠进展期腺瘤中的应用，所述目标基因位于6号染色体外显子区的 cg13806231、cg01937314、cg07935151、cg07797068甲基化位点，该 CpG位点及其上下游200bp的DNA碱基序列如SEQ ID NO：3所示。