[发明专利]一种快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的分子标记

说明书

本发明公开了一种快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的分子标记。涉及作物遗传育种技术领域。本发明提供了扩增分子标记的引物对和快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的方法，能够在苗期从DNA层面，短时间对甜瓜P149的分离群体进行分子标记鉴定，有效区分杂合单株和纯合单株，有目的地选择纯合单株，连续自交2代，即可获得纯系，减少杂合单株的误选，提高亲本提纯的效率，检测P149纯杂效率高。相比于利用表型鉴定筛选纯合单株，无需大田定植甜瓜，结果准确。

技术领域

本发明涉及作物遗传育种技术领域，更具体的说是涉及一种快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的分子标记。

背景技术

本发明涉及作物遗传育种分析过程中，亲本的纯度鉴定和纯化环节。甜瓜经济效益高，爬地栽培每亩收益5000-6000元，是重要的经济作物。培育耐低温弱光性能强、适宜早春栽培的甜瓜新品种，是确保甜瓜提早上市、周年供应、增加农民收益的重要举措。

利用分子标记辅助选育甜瓜新品种，能够缩短育种周期，提高选育效率，但是连锁标记的开发，有赖于利用纯合的、具极端性状的甜瓜亲本构建遗传群体。前期研究(甜瓜耐低温弱光生理指标数据处理及极端材料筛选，华北农学报，2020183-188，宋慧等)发现P149对低温弱光环境(光照4000lux，温度15/8℃，光周期12/12h)表现敏感，是筛选甜瓜耐低温弱光特性紧密连锁分子标记的极端亲本之一。

极端亲本的纯度，会直接影响标记开发的准确性和效率。亲本纯度越高，亲本的极端表型越稳定，双亲之间筛选到的多态性标记也越稳定；构建的遗传群体重组交换明显，表型分离更加符合正态分布。如果亲本不纯，亲本的极端表型不稳定，双亲之间筛选到的多态性标记会随着亲本单株变化而变化；通过杂交获得的遗传群体表型偏分离。因此，注意和保持甜瓜极端亲本的纯度，是开发甜瓜紧密连锁分子标记环节必须认真解决的重要问题。

在利用P149筛选双亲多态性分子标记的过程中，我们发现，筛选结果会随着P149单株DNA的更换而出现多态性消失的问题。P149群体单株果实表型差异不显著，通过表型观察难以去杂。一旦选择杂合P149单株进行标记筛选，或者进行后续的杂交或者自交，都会因为杂合体分离产生混杂。

因此，P149纯度不高，提纯困难，严重影响利用P149开发甜瓜耐低温弱光分子标记的进程，亟需建立一种快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的分子标记。在短时间内可以纯化甜瓜亲本P149。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速鉴定和纯化甜瓜亲本P149的分子标记，包括以下分子标记的组合：SSR1/2、SSR3/4、SSR5/6、SSR7/8、SSR9/10、SSR11/12、SSR13/14、SSR15/16、SSR17/18、SSR19/20和SSR21/22；扩增所述分子标记德引物核苷酸序列如下：

SSR1/2上游引物序列为5’-GAAAGAATGGGGGAAAAGAG-3’，如SEQ ID NO.1所示；

SSR1/2下游引物序列为5’-ACCAATCCATCACTCTCACT-3’，如SEQ ID NO.2所示；

SSR3/4上游引物序列为5’-CGATCTTCTTTATTCTTCGCC-3’，如SEQ ID NO.3所示；

SSR3/4下游引物序列为5’-GCTGTAAAACGAAACGGAGA-3’，如SEQ ID NO.4所示；

SSR5/6上游引物序列为5’-CCATCTCTTAACTTTCTCTC-3’，如SEQ ID NO.5所示；

SSR5/6下游引物序列为5’-TACATTATGGGTAAGGTAAG-3’，如SEQ ID NO.6所示；