[发明专利]一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法在审
| 申请号： | 202111543725.1 | 申请日： | 2021-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN114525326A | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 李赟;刘文兰 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院（深圳市转化医学研究院） |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 崔瑞迎 |
| 地址： | 518000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 nmaldi tof 技术 snp 基因 方法 | ||
1.一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、针对待测样本DNA的多个SNP位点设计并合成探针以及PCR扩增引物，所述探针为拱桥式探针，包括两端的探针结合区和中间的探针臂，所述探针臂为非人类序列；
S2、将探针和样本DNA进行杂交；
S3、在S2的杂交反应产物中加入延伸连接反应液，混匀，进行延伸、连接；
S4、在S3的反应产物中加入核酸外切酶Ⅶ，混匀，进行酶切；
S5、在S4的反应产物中加入S5N7引物的混合液、纯化水、PCR预混液，混匀，进行PCR反应；
S6、将S5的反应产物脱盐后，上样至MALDI-TOF-MS检测，得到检测结果。
2.根据权利要求1所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，所述探针臂序列为TAGATCGCTAAGGCGA。
3.根据权利要求2所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，所述引物序列如下：
S5引物：5'-TAGATCGC-3'；
N7引物：5'-TAAGGCGA-3'。
4.根据权利要求3所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，S2的杂交反应体系为：X ul的样本DNA，1ul的探针MIX，1ul的杂交缓冲液，纯化水补足10ul，X表示10～50ng DNA样本体积。
5.根据权利要求4所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，S2的杂交反应程序为：98℃，5min；60℃，1.5h；4℃，保持。
6.根据权利要求5所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，S3中延伸连接反应液的加入量为1ul，延伸、连接的程序均为：60℃，10min；4℃，保持。
7.根据权利要求6所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，S4的核酸外切酶Ⅶ加入量为1ul，酶切的反应程序为：37℃，30min；95℃，10min；4℃，保持。
8.根据权利要求7所述的一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法，其特征在于，S5中加入S5N7引物的混合液、纯化水、PCR预混液的量依次为25ul、8.5ul、3ul，PCR反应程序为：98℃，30s；98℃，10s，61℃，30s，72℃，20s，20个循环；72℃，5min；4℃，保持。
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