[发明专利]用于地黄属植物鉴定的DNA条形码序列组合及鉴定方法

权利要求书

1.用于地黄属植物鉴定的DNA条形码组合，其特征在于，该DNA条形码组合由R255序列和ITS序列拼接构成；R255序列的核苷酸序列如 SEQ ID NO:1所示，ITS序列的核苷酸序列如 SEQ ID NO:2所示。

2.DNA条形码组合鉴定地黄属植物的方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤 1，提取待测样品DNA；

步骤2，使用ITS序列的引物以及R255序列的引物分别进行PCR 扩增反应，分别得到待测样品R255序列的扩增产物和待测样品ITS序列的扩增产物；

PCR扩增反应的反应体系总体积为 20uL，1μL的20-30ng/uL模板DNA，正反向引物各0.3μL，10μL 的2×Taq PCR MasterMix， 8.4μL的双蒸水；

R255的PCR扩增条件：94℃预变性5分钟，94℃变性45秒，57℃退火45秒，72℃延伸l分钟，35个循环，72℃延伸6分钟，4℃保温；

ITS的PCR扩增条件：94℃预变性5分钟， 94℃变性45秒，55℃退火45秒，72℃延伸l分钟，35个循环，72℃延伸5分钟，4℃保温；

步骤3，将步骤2得到的扩增产物，分别做凝胶电泳，将有明亮单一条带的样品进行双向测序，分别得到待测样品R255序列和待测样品ITS区序列；

步骤4，将步骤3得到的待测样品R255双向测序的两条序列导入软件拼接成一条序列，得到的待测样品R255的序列，将待测样品ITS双向测序两条序列导入软件拼接成一条序列，得到的待测样品ITS的序列；

步骤5，将步骤4得到的待测样品R255序列和如SEQ ID NO:1所示的R255核苷酸序列比对切齐，待测样品ITS序列和如SEQ ID NO:2所示的ITS核苷酸序列比对切齐；

步骤6，将步骤5得到的比对好的R255序列和ITS区序列依次导入软件拼接在一起形成组合条形码序列R255+ITS；

步骤7，将步骤6得到的组合条形码序列R255+ ITS，再导入软件构建系统发育树，待测样品和某个种聚在一起，则说明待测样品是该物种。