[发明专利]一种从竹荪中提取分离蛋白质的方法

说明书

本发明公开了一种从竹荪中提取分离蛋白质的方法，包括：竹荪干燥后粉碎，得到竹荪粉末，采用异丙醇进行脱脂处理，得到脱脂竹荪粉末；以去离子水为提取溶剂，使用木瓜蛋白酶进行酶提，离心，上清液浓缩，得到竹荪蛋白水提液；将萃取溶剂和竹荪蛋白水提液混合，调节pH至6.0～6.5，离心，进行双水相萃取，得到上相萃取物、下相萃取物；下相萃取物透析处理，干燥，得到下相产物；采用初始洗脱溶剂，将下相产物配成上柱样品，过离子交换层析柱，以氯化钠溶液为洗脱溶液，按照盐浓度由低到高进行洗脱，分别收集不同盐浓度段的样品，进行透析和冷冻干燥，得到高纯度蛋白质。选择BCA法测定蛋白质纯度，蛋白质纯度大于99％。

技术领域

本发明属于提取分离纯化领域，具体涉及一种从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法。

背景技术

蛋白质是保证机体健康最重要的营养素，它是维持和修复机体以及细胞生长所必需的，它不仅影响机体组织如肌肉的生长，还参与激素的产生、免疫功能的维持、其它营养物质和氧的转运以及血红蛋白的生成、血液凝结等。随着生活水平的提高，人们对食物营养价值及各种营养元素的搭配越来越注重，高蛋白的食物及食物制品越来越为人们所喜爱。

微生物相对于动植物而言生长速率更快，培养成本更低，细胞中蛋白含量很高。

竹荪(学名：Dictyophora indusiata(Vent.ex Pers)Fisch)是鬼笔科竹荪属真菌，又名竹笙、竹参，是寄生在枯竹根部的一种隐花菌类。常见并可供食用的竹荪有4种：长裙竹荪、短裙竹荪、棘托竹荪和红托竹荪。干品竹荪中粗蛋白的含量高达37.94％，总糖含量为35.41％，粗纤维含量为4.74％，粗脂肪含量为4.98％，灰分含量为10.56％。可见，竹荪菌体含有丰富的蛋白质及氨基酸成分，为蔬菜和水果所不及，且所含的氨基酸大多以菌体蛋白的形态存在，不易流失，因此竹荪可以作为良好的蛋白质来源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从竹荪中提取分离高纯度蛋白质、且操作简便的方法，使用有机溶剂浸泡除去油脂，使用双水相萃取实现菌体中的蛋白质和多糖的分离，通过过滤和透析除去粗纤维和灰分，最终得到高纯度蛋白质。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，包括以下步骤：

步骤(1)、竹荪干燥后粉碎，得到竹荪粉末，以异丙醇为脱脂试剂，进行脱脂处理，得到脱脂竹荪粉末；以去离子水为提取溶剂，使用木瓜蛋白酶进行酶提，离心，上清液浓缩，得到竹荪蛋白水提液；

步骤(2)、将萃取溶剂和竹荪蛋白水提液混合，调节pH至6.0～6.5，离心，再进行双水相萃取，得到上相萃取物、下相萃取物；

步骤(3)、下相萃取物进行透析处理，透析结束后干燥，得到下相产物；采用初始洗脱溶剂，将下相产物配成上柱样品，过离子交换层析柱，以氯化钠溶液为洗脱溶剂，按照盐浓度由低到高进行洗脱，分别收集不同盐浓度段的样品，进行透析和冷冻干燥，得到高纯度蛋白质。

步骤(1)中，所述的竹荪粉末与异丙醇的质量体积比为1:25g/mL，即每20g竹荪粉末使用500mL异丙醇。

所述的木瓜蛋白酶与脱脂竹荪粉末的质量比为2:100～2.5:100，优选为2:100。

所述的脱脂竹荪粉末与去离子水的质量体积比为1:10～1:20g/mL。

所述的酶提的温度为40～50℃，优选为50℃，pH为8～10，优选为8，提取时间为4～8h，优选为4h。

酶提后，于95℃灭酶，样品以转速6000r/min离心15min，上清液旋蒸浓缩至无液体挥发，再用水配制竹荪蛋白水提液。

所述的竹荪蛋白水提液为去离子水体积的1/8～1/6。