[发明专利]一种从竹荪中提取分离蛋白质的方法

权利要求书

1.一种从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤(1)、竹荪干燥后粉碎，得到竹荪粉末，以异丙醇为脱脂试剂，进行脱脂处理，得到脱脂竹荪粉末；以去离子水为提取溶剂，使用木瓜蛋白酶进行酶提，离心，上清液浓缩，得到竹荪蛋白水提液；

步骤(2)、将萃取溶剂和竹荪蛋白水提液混合，调节pH至6.0～6.5，离心，再进行双水相萃取，得到上相萃取物、下相萃取物；

步骤(3)、下相萃取物进行透析处理，透析结束后干燥，得到下相产物；采用初始洗脱溶剂，将下相产物配成上柱样品，过离子交换层析柱，以氯化钠溶液为洗脱溶剂，按照盐浓度由低到高进行洗脱，分别收集不同盐浓度段的样品，进行透析和冷冻干燥，得到高纯度蛋白质。

2.根据权利要求1所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的竹荪粉末与异丙醇的质量体积比为1:25g/mL。

3.根据权利要求1所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的木瓜蛋白酶与脱脂竹荪粉末的质量比为2:100～2.5:100，优选为2:100；所述的脱脂竹荪粉末与去离子水的质量体积比为1:10～1:20g/mL。

4.根据权利要求1所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的酶提的温度为40～50℃，优选为50℃，pH为8～10，优选为8，提取时间为4～8h，优选为4h。

5.根据权利要求1所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(1)中，上清液旋蒸浓缩至无液体挥发，用水配制竹荪蛋白水提液；所述的竹荪蛋白水提液为去离子水体积的1/8～1/6。

6.根据权利要求1所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的竹荪蛋白水提液与萃取溶剂的体积比为2.5～5:100。

7.根据权利要求1所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的萃取溶剂为聚乙二醇和硫酸铵的水溶液，聚乙二醇的质量分数为17～18％，优选为18％，硫酸铵的质量分数为16～18％，优选为17％；

所述的聚乙二醇分子量为3000～5000，优选为4000。

8.根据权利要求7所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的萃取溶剂中还含有NaCl，NaCl的质量分数为0.01～1.5％，优选为1％。

9.根据权利要求所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(3)中，上相萃取物采用规格为8-14kDa的透析袋进行透析处理。

10.根据权利要求所述的从竹荪中提取分离高纯度蛋白质的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述的上柱样品与柱体积的体积比为5:100～10:100；

所述的离子交换层析柱的填料为DEAE-琼脂糖凝胶FF；

所述的洗脱溶剂为浓度0.005mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L NaCl、0.5mol/L的NaCl溶液，按照盐浓度由低到高进行洗脱。