[发明专利]一种筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法在审
| 申请号： | 202111507320.2 | 申请日： | 2021-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN114164255A | 公开（公告）日： | 2022-03-11 |
| 发明（设计）人： | 刘建喜 | 申请（专利权）人： | 南通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12N15/85;C12N15/12;C12N15/65;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 曹振中 |
| 地址： | 226001 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 d2r nr2b 相互作用 阻断剂 方法 | ||
1.一种筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法， 其特征在于：包含以下步骤：
S1：在D2R受体的羧基端融合Nano荧光素酶的大亚基LgBIT；在NR2B的羧基端融入Nano荧光素酶低亲和力的小亚基SmBIT；
S2：利用脂质体将D2R-LgBIT和NR2B-SmBIT表达质粒共转染到HEK293细胞，并在48小时后，洗脱细胞并计数；然后将细胞分别利用移液器接种到384孔板，离心沉淀细胞；
S3：将有生物学活性的化合物以适当的浓度稀释到DMEM中，每孔加入5微升化合物，让化合物与D2R-NR2B二聚体充分结合；
S4：30分钟后，在每孔细胞加入20微升Nano荧光素酶底物加入荧光素酶底物，室温孵育15分钟后利用高速酶标仪读板。
2.根据权利要求1所述的筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法，其特征在于：所述S2中细胞数的数值范围为2000-20000个/20微升/孔；读板时间为2-30分钟。
3.根据权利要求2所述的筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法，其特征在于：所述S2中细胞数为2000个/20微升/孔；读板时间为10分钟。
4.根据权利要求1所述的筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法，其特征在于：所述DMSO的浓度为0.5%。
5.根据权利要求1所述的筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法，其特征在于：所述S4中，化合物的终浓度为20µM。
6.根据权利要求1所述的筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法，其特征在于：所述S4中室温孵育15分钟。
7.根据权利要求1所述的筛选D2R与NR2B相互作用阻断剂的方法，在D2R受体的羧基端融合Nano荧光素酶的大亚基LgBIT；在NR2B的羧基端融入Nano荧光素酶低亲和力的小亚基SmBIT。
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