[发明专利]一种用于检测JPH3基因的引物对、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测JPH3基因的引物对、试剂盒及检测方法；引物对的正向引物的5’端和反向引物的5’端中的至少一端由荧光基团标记，引物对序列：JPH3‑famF：GGCAGAGCCGGGGCCGG；JPH3‑R：GGTTCCCTGCACAGAAACCATC；本发明方法通过提取DNA并利用上述引物对进行PCR扩增，对PCR扩增后的产物进行毛细管电泳，分析JPH3基因CTG重复序列情况，得出JPH3基因CTG重复数，对HDL2进行评估，整个检测过程耗时短、效率高。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测JPH3基因的引物对、试剂盒及检测方法。

背景技术

亨廷顿病样2(Huntington Disease-like 2,HDL2)是一种类似于亨廷顿病(Huntington Disease,HD)的神经退行性疾病，其临床表型、遗传特征、神经病理学和发展均与HD相似。亨廷顿病样2(HDL2)通常出现在中年，伴有持续的运动、情绪和认知异常三联征。神经系统异常包括舞蹈病、运动减退(僵直、运动迟缓)、构音障碍和后期反射亢进，在疾病的持续时间和运动和认知障碍的进展之间有很强的相关性，会导致10至20年内死亡。

在HDL2相关的IPH3基因中CTG会出现大约大于40个三碱基CTG重复扩增。但目前对IPH3基因中CTG重复状况并没有适配分析方法，所以需要设计新的检测方法对CTG重复状况进行分析，以便对IPH3基因进行分析。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明所要解决的问题是：如何提供一种用于检测JPH3基因的引物对、试剂盒及方法，以解决现有技术中对IPH3基因中CTG重复状况分析方法缺失的问题。

为了解决上述问题，本发明采用了如下的技术方案：

HDL2相关的IPH3基因中CTG会出现大约大于40个三碱基CTG重复扩增。所以可以尝试设计一种检测CTG重复状况的引物及方法，通过对重复数的确定，以便确定IPH3基因。

本发明主要内容：合成引物对，引物对的正向引物的5’端和反向引物的5’端中的至少一端由荧光基团标记；从待测样本中提取基因组DNA，作为DNA模板；配置包含所述引物对和所述扩增模板的PCR扩增体系；对所述PCR扩增体系进行扩增反应，获得含有CTG三核苷酸重复序列的PCR产物；毛细管电泳检测所述PCR产物，并根据电泳检测结果计算所述待测样本的JPH3基因CTG三核苷酸重复数。

其一，本发明提供一种用于检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的引物对，所述引物对的正向引物的5’端和反向引物的5’端中的至少一端由荧光基团标记，所述引物对序列如下：

JPH3-famF：GGCAGAGCCGGGGCCGG；

JPH3-R：GGTTCCCTGCACAGAAACCATC。

更优的，所述引物对famF向引物5’端带5’-FAM荧光基团。

其二，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包含上述的引物对。

具体的，所述试剂盒包括25体积份的2xGoldStar Best MasterMix、2.4体积份的DMSO、13.6体积份的无核酸酶纯化水和4体积份上述的引物对。

其三，本发明提供一种检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的非诊断目的的检测方法，包括：

1)提取DNA并利用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增；

2)对所述步骤1)PCR扩增后的产物进行毛细管电泳；

3)分析JPH3基因中CTG重复情况。

进一步，所述步骤1)PCR扩增包括：