[发明专利]一种用于检测JPH3基因的引物对、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的引物对，其特征在于，所述引物对的正向引物的5’端和反向引物的5’端中的至少一端由荧光基团标记，所述引物对序列如下：

JPH3-famF：GGCAGAGCCGGGGCCGG；

JPH3-R：GGTTCCCTGCACAGAAACCATC。

2.根据权利要求1所述用于检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的引物对，其特征在于，所述引物对famF向引物5’端带5’-FAM荧光基团。

3.一种用于检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物对。

4.根据权利要求3所述用于检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括25体积份的2xGoldStar Best MasterMix、2.4体积份的DMSO、13.6体积份的无核酸酶纯化水和4体积份权利要求1所述的引物对。

5.一种检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的非诊断目的的检测方法，其特征在于，包括：

1)提取DNA并利用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增；

2)对所述步骤1)PCR扩增后的产物进行毛细管电泳；

3)分析JPH3基因中CTG重复情况。

6.根据权利要求5所述检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的非诊断目的的检测方法，其特征在于，所述步骤1)PCR扩增包括：

按DNA检测样本数量配置扩增反应液混合液，所述扩增反应液混合液中：2×GoldStarBest Master Mix试剂用量25×nμl；10uM的JPH3-famF引物用量2×nμl；10uM的JPH3-R引物用量2×nμl；DMSO用量2.4×nμl；ddH₂O用量13.6×nμl；所述n＝检测样本数+1；按45ul扩增反应混合液中加入5ulDNA；进行PCR扩增。

7.根据权利要求6所述检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的非诊断目的的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增包括：

在PCR仪中先以95℃变性1分钟；再运行35次如下循环：94℃变性30秒、59℃退火30秒、72℃延伸1分钟；之后72℃延伸5分钟，4℃保存。

8.根据权利要求5所述检测JPH3基因CTG重复序列动态突变的非诊断目的的检测方法，其特征在于，所述步骤2)对所述步骤1)PCR扩增后的产物进行毛细管电泳包括：

对PCR扩增产物进行稀释，在ddH₂O中加入PCR扩增产物；取ABI GS500-LIZ内标和HIDI按1∶250的体积比混合后，取混合液与稀释后的PCR扩增产物混合制成上机混合液；将配置好的上机混合液在PCR仪上以95℃运行3分钟后，冰水混合物中冷却5分钟，温度为0℃，作变性处理；

上机混合液在ABI3730xl测序仪中进行检测，采用G5颜色分组，在ABI3730xl测序仪中的分型参数设置如下：检测恒温OVEN_Temperature 60℃，缓冲液温度Buffer_Temperature35℃；预电泳电压PreRun_Voltage 15kV，预电泳时间PreRun_Time 180s；注入电压Injection_Voltage为1.5kV；注入时间Injection_Time为15s；第一次读数First_ReadOut_Time 300ms；第二次读数Second_ReadOut_Time 300ms；电泳电压Run_Voltage 15kV；突跳步数Voltage_Number_of_steps设置为10步；突跳电压Voltage_steps_Interval设置为20s；电压容差Voltage_Tolerance设置为0.6kV；电流Current_Stability为30uA，变温延迟Ramp_Delay 1s；日期延迟Data_Delay 600s；电泳时间Run_Time 1600s。