[发明专利]肝癌早期筛查的引物探针组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种肝癌早期筛查的引物探针组合物，其特征在于，包括：

正向引物F1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

反向引物R1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

探针P1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

正向引物F2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

反向引物R2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

探针P2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物还包括内参基因的正向引物F3、反向引物R3和探针P3，核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9所示。

3.根据权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，各探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的引物探针组合物，其特征在于，探针P1的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；探针P2的5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；探针P3的5’端标记有ROX荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团。

5.一种用于肝癌早期筛查的试剂盒，包括第一核酸反应液，其特征在于，所述第一核酸反应液包括如权利要求1至4任一项所述的引物探针组合物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二核酸反应液，所述第二核酸反应液还包括Taq酶、buffer和dNTPs。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述第二核酸反应液包括2×FastFireqPCR PreMix。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括亚硫酸盐。

9.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的判读标准为：

若荧光通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤37，则判断该通道对应的基因甲基化阳性；若该荧光通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct37且内参基因对应的荧光通道Ct≤40，则判断该通道对应的基因甲基化阴性。

10.一种非诊断治疗目的的肝癌早期筛查的方法，其特征在于，包括使用如权利要求5至9任一项所述的试剂盒使经甲基化出后的样本进行PCR扩增反应。