[发明专利]高效生产戊二酸的重组大肠杆菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种生产戊二酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是在大肠杆菌宿主中表达芳香醛合酶AAS、胺氧化酶Mao以及醛脱氢酶Glox；

所述的芳香醛合酶AAS的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的胺氧化酶Mao的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的醛脱氢酶Glox的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的芳香醛合酶AAS基因、胺氧化酶Mao基因以及醛脱氢酶Glox基因通过双质粒表达系统进行表达，其中，芳香醛合酶AAS基因和胺氧化酶Mao基因通过同一质粒进行表达。

3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的双质粒表达系统为pETM6R1质粒、pET28a质粒、PRSF质粒、pCOR 质粒、pCDF质粒和PACYC质粒中的两种组合。

4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的大肠杆菌宿主为大肠杆菌E.coli BL21（DE3）、大肠杆菌E.coli JM109（DE3）或大肠杆菌E.coli MG1655（DE3）。

5.一种权利要求1~4任一项所述的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将芳香醛合酶基因和胺氧化酶基因连接到第一载体上，得到第一重组载体；

S2、将醛脱氢酶基因连接到第二载体上，得到第二重组载体；

S3、将第一重组载体和第二重组载体导入大肠杆菌宿主中，筛选能够表达芳香醛合酶AAS、胺氧化酶Mao以及醛脱氢酶Glox的重组菌，即为所述的重组大肠杆菌。

6.一种权利要求1~4任一项所述的重组大肠杆菌在生产戊二酸中的应用，其特征在于，所述的应用是以重组大肠杆菌的全细胞为催化剂，转化L-赖氨酸生产戊二酸。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在催化体系中，L-赖氨酸的添加量为20~50g/L。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在催化体系中，还包括4~8mM NAD⁺。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，转化的条件为：pH为7.5~8.5，转化温度为28~32℃，转速为150~250rpm。