[发明专利]一种同时检测多种猫病原体的试剂盒及其检测方法与应用

说明书

本发明公开了一种同时检测多种猫病原体的试剂盒及其检测方法与应用。其通过设计得到的特异性引物组和探针组，实现在一个反应中同时对猫瘟病毒、猫杯状病毒、猫传染性腹膜炎病毒、猫弓形虫、猫疱疹病毒、猫衣原体和猫支原体进行快速和准确的检测和鉴定。基于此设计得到的检测试剂盒特异性强且灵敏度高，可以有效检测出浓度为1.7×10²copies/mL的猫病原体，且无需多次反复检测，实际应用准确度高，能够广泛用于猫科病毒感染的疫情监测和防控。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及了一种同时检测多种猫病原体的试剂盒及其检测方法与应用。

背景技术

猫泛白细胞减少症又名猫瘟、猫传染性肠炎，是猫的一种急性高度接触性传染病，主要由猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus，FPV)引起。FPV属于细小病毒科细小病毒属成员，该病毒进入机体后，可以在肾脏上存活一年以上，因此，会给猫科动物带来严重危害。临床表现多以突然发高热、顽固性呕吐、腹泻、脱水、循环障碍及白细胞急剧减少为主要特征。如果母猫在怀孕期感染FPV，会造成死胎、流产或致使初生小猫出现神经症状，有较大的危害性。

猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)会引起猫病毒性呼吸道传染病，该病毒属于杯状病毒科，其感染的主要表现为上呼吸道症状，即精神沉郁、浆液性和粘液性鼻漏、结膜炎、口腔炎、气管炎、支气管炎，伴有双相热型发热。猫杯状病毒感染是猫的多发病之一，发病率较高。

猫传染性腹膜炎是由猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitisvirus)引起的一种慢性、渐进性和致死性传染病，以腹膜炎、大量腹水积聚及致死率较高为主要特征。猫传染性腹膜炎病毒主要感染0.5～5岁的猫，尤其是12月龄以下的猫感染性最强，此外，易感染猫群还包括纯种猫、多只猫混养以及流浪猫。猫终身携带冠状病毒，一旦体质降低时就有可能会发病，而且，该病毒会经由猫的粪便经口鼻传染其他的猫，具有较高的危害性和传播能力。

弓形虫(Toxoplasma Gondii)是细胞内寄生虫，是一种专性细胞内寄生虫，其寄生于细胞内，随血液流动，到达全身各部位，破坏大脑、心脏和眼底，致使人的免疫力下降，患各种疾病。弓形虫的生活周期需要两个宿主，中间宿主包括爬虫类、鱼类、昆虫类、鸟类、哺乳类等动物和人，终宿主则仅为猫科动物。

猫疱疹病毒(FHV-1)的感染对象只有猫科动物，FHV-1可引起猫的急性和高度接触性的上呼吸道感染，发病率很高(可达100％)。虽然成年猫感染后大多能够痊愈，但幼仔猫感染后症状严重，病死率可达50％，而且终生带毒排毒，并可垂直传播，危害很大。

猫衣原体感染的疾病流行率高，是猫的七大常见传染病之一，容易导致猫慢性结膜炎。衣原体感染指的是一种细胞内革兰氏阴性菌，主要引起眼部感染及上呼吸道感染。从病原性质上来讲，其不仅限于感染眼部和呼吸道，还可能会成为全身感染的病原，不及时治疗可能会发生全身性衣原体感染。

支原体是一种介于细菌、病毒的原核微生物，通过寄居在宿主细胞表面的受体上吸收营养，并释放有毒物质，从而损伤细胞和组织。猫支原体感染会引起猫传染性呼吸道疾病，但相对其他病毒发生率相对较低。主要症状是咳嗽、打喷嚏、结膜炎、呼吸困难和鼻子分泌脓性粘液等。猫支原体感染没有特殊的预防方法，因此猫一旦发病，需要及时治疗。

上述几种疾病在感染后产生的临床症状相似，而且容易产生混合感染，对临床诊断带来极大的干扰性，而且，目前单一性的猫病原体检测耗时长，不能实现对多种病原进行快速和准确的检测和鉴别。因此，有必要建立一种快速的可同步实现大量不同病原的早期诊断方法，以节约诊断时间，以便尽快采取有效的防控措施。

发明内容