[发明专利]一种检测基因拷贝数变异的试剂及其应用有效
| 申请号: | 202111342498.6 | 申请日: | 2021-11-12 | 
| 公开(公告)号: | CN113930485B | 公开(公告)日: | 2023-08-22 | 
| 发明(设计)人: | 黄文静;王煜;朱碧银;赵鑫;陈可欣 | 申请(专利权)人: | 人和未来生物科技(长沙)有限公司 | 
| 主分类号: | C12Q1/6851 | 分类号: | C12Q1/6851;C12Q1/6883;C12N15/11 | 
| 代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 肖云 | 
| 地址: | 410020 湖南省长沙市长沙高*** | 国省代码: | 湖南;43 | 
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 检测 基因 拷贝 变异 试剂 及其 应用 | ||
1.一种检测基因拷贝数变异的试剂在制备检测CYBA基因拷贝数变异的试剂盒中的应用,其特征在于,所述试剂包括序列如SEQ ID No.1所示的正向引物序列、序列如SEQ IDNo.2所示的反向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的荧光探针;所述试剂还包括检测内参基因GAPDH的引物和探针;所述内参基因GAPDH的引物和内参探针包括核苷酸序列如SEQ IDNo.10所示的上游引物和SEQ ID No.11所示的下游引物以及核苷酸序列如SEQ IDNo.12所示的荧光探针。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述荧光探针的5’端有荧光基团,3’端有荧光淬灭基团;所述荧光基团选自VIC、FAM、TET、JOE和CY3中的一种;所述荧光淬灭基团选自TAMRA、MGB、BHQ中的一种。
3.一种非疾病治疗和诊断目的检测CYBA基因拷贝数变异的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:提取样本DNA后使用如权利要求1中所述的试剂进行荧光定量PCR扩增反应,根据反应结果确定是否样本是否存在CYBA基因拷贝数变异。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述荧光定量PCR扩增反应的体系包括:浓度为50-300nM的引物,浓度为50-300nM的探针,模板DNA0.5-200ng。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述荧光定量PCR扩增反应的体系包括:浓度为150-250nM的引物,浓度为150-250nM的探针,模板DNA10-50ng。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述荧光定量PCR的扩增条件为:93-96℃预变性3-10min;93-96℃变性25-35s,55-60℃退火延伸13-20s,采集荧光基团通道荧光信号,共计40-60个循环。
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