[发明专利]一种单纯疱疹病毒1型、2型和伪狂犬病毒三重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒

说明书

本发明提供一种单纯疱疹病毒1型、2型和伪狂犬病毒三重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒。该检测组合物由HSV‑1‑UL49基因上游引物HSV‑1‑UL49F、下游引物HSV‑1‑UL49R和探针HSV‑1‑UL49P，HSV‑2‑gG基因上游引物HSV‑2‑gGF、下游引物HSV‑2‑gGR和探针HSV‑2‑gGP，PRV‑UL24基因上游引物PRV‑UL24F、下游引物PRV‑UL24R和探针PRV‑UL24P组成。该检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可有效区分HSV‑1、HSV‑2和PRV的核酸，为病毒性脑炎的临床鉴别诊断提供了很好技术支撑，具有良好的社会应用前景和价值。

技术领域

本发明涉及一种单纯疱疹病毒1型、2型和伪狂犬病毒三重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒，属于分子检测技术领域。

背景技术

单纯疱疹病毒是α疱疹病毒亚科成员，包括单纯疱疹病毒1型(herpes simplexvirus type 1，HSV-1)和单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2，HSV-2)两个血清型。人类是单纯疱疹病毒的储存宿主，HSV-1和HSV-2在世界范围内均具有很高的感染率。HSV是一种典型的嗜神经病毒，原发感染后可沿周围感觉神经纤维进入感觉神经或自主神经节潜伏下来，并建立终身感染。受人体免疫状况和外界环境的刺激，会周期性的临床或亚临床再激活，具有多种临床表现，包括无症状感染和各种黏膜病症(眼、口腔及嘴角黏膜处)，生殖器疱疹以及中枢神经系统并发症等。HSV-1也是引起成人严重散发性脑炎的主要病原之一，HSV-2是全世界性生殖器溃疡最常见的病因，特别是对患有免疫抑制病的人群，HSV感染是一个特别的威胁。

伪狂犬病毒(pseudorabies virus，PRV)，也称为猪疱疹病毒1型(suidherpesvirus 1，SuHV-1)，同样属于α疱疹病毒亚科，PRV可以感染除人之外的多种动物，如狗、猫、羊、牛、狐狸、貂和鼠等，致死率几乎为100％。但2018年以来，我国陆续报道了23例伪狂犬病毒感染人的案例。在感染早期(通常为1周以内)，主要表现为类似流感的症状，包括发热、头痛和不同程度的呼吸道症状；然后会快速进展到神经系统，包括癫痫和意识障碍，甚至昏迷等；此外，60％(12/20)的病例会出现严重的视力障碍，77.3％(17/22)的病例会伴发肺炎；患者虽然都接受了系统的抗病毒治疗，但是预后均非常差。因此，PRV在特定条件下，具有潜在感染人的能力，并引起严重的临床症状，有必要将其列入病毒性脑炎需要排查的病原；且PRV感染人后在早期与流感症状相似，临床症状不典型，中后期病程又进展很快，因此快速的鉴别诊断对于该病的早发现和早治疗具有重要意义。

传统的病毒性脑炎病原体检测技术包括脑脊液的病毒分离、ELISA、脑电图和影像学检查等，上述检测方法均具有一定的局限性，如病毒分离较难、特异性抗体检测时间相对滞后、病原无法确诊等。荧光定量PCR检测技术具有高敏感性、高特异性、检测通量高、耗时短、和成本低等诸多优势，已被广泛应用于临床病原微生物感染的精准诊断并辅助疾病治疗。鉴于病毒性脑炎的严重危害，急需开发出一种快速、特异和敏感的针对单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型和伪狂犬病毒的荧光定量检测方法，从而为病毒性脑炎的临床鉴别检测提供技术支撑。

发明内容

针对现有技术的不足和临床疫病诊断检测的需求，本发明的目的是提供一种单纯疱疹病毒1型、2型和伪狂犬病毒三重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种单纯疱疹病毒1型、2型和伪狂犬病毒三重荧光定量PCR检测组合物，由单纯疱疹病毒1型UL49基因的上游引物HSV-1-UL49F、下游引物HSV-1-UL49R和探针HSV-1-UL49P，单纯疱疹病毒2型gG基因的上游引物HSV-2-gGF、下游引物HSV-2-gGR和探针HSV-2-gGP，伪狂犬病毒UL24基因的上游引物PRV-UL24F、下游引物PRV-UL24R和探针PRV-UL24P组成；

所述引物和探针的序列如下：