[发明专利]基于ddPCR的痘苗病毒lister株定量测定方法在审
| 申请号： | 202111320072.0 | 申请日： | 2021-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN113862399A | 公开（公告）日： | 2021-12-31 |
| 发明（设计）人： | 程欣;张妍;孙菁;韩佳迪;单艺玮;林凡佳 | 申请（专利权）人： | 东曜药业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 项凯 |
| 地址： | 215127 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 ddpcr 痘苗 病毒 lister 定量 测定 方法 | ||
1.一种定量测定样本中痘苗病毒lister株的方法，所述样本为改造痘苗病毒，所述改造痘苗病毒是通过在痘苗病毒lister株的原始TK片段中，删除特异性片段并插入目的片段获得的，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
提取步骤：提取样本中的病毒DNA；
检测步骤：以特异性片段作为探针，以提取得到的病毒DNA作为模板，使用ddPCR对样本中的痘苗病毒lister株进行定量分析，得到样本中痘苗病毒lister株的绝对浓度；
所述ddPCR采用的上游引物和下游引物能够特异性扩增原始TK片段以及删除特异性片段并插入目的片段后的TK片段。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性片段的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ IDNO:2，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:3。
4.如权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述ddPCR的反应体系包含ddPCRSupermix for probes 11μL、浓度100nM的上游引物0.198μL、浓度100nM的下游引物0.198μL、浓度5μM的探针0.55μL、浓度100μM的Template 9.9μL以及H2O 0.154μL。
5.如权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，所述原始TK片段的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。
6.一种定量测定样本中痘苗病毒lister株的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的成分包含探针、上游引物以及下游引物；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:1；所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:2；所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:3。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述上游引物和下游引物的浓度为100nM。
8.如权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的成分还包含ddPCRSupermix for probes。
9.权利要求1～5任一项所述的方法或权利要求6～8任一项所述的试剂盒在痘苗病毒lister株定量测定中的应用。
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