[发明专利]一种卤醇脱卤酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种卤醇脱卤酶突变体N176G，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.根据权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶突变体N176G的制备方法，其特征在于：将氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的放射形土壤杆菌卤醇脱卤酶的第176位天冬氨酸突变为甘氨酸所得。

3.一种含有权利要求1所述的卤醇脱卤酶突变体N176G的编码基因，其特征在于：所述编码基因的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.一种含有权利要求3所述编码基因的重组基因工程菌。

5.根据权利要求1所述的一种卤醇脱卤酶突变体N176G的应用，其特征在于：所述卤醇脱卤酶突变体作为生物催化剂，用于催化化合物I不对称脱卤环化合成手性环氧化合物II，合成路线如下：

6.如权利要求5所述的一种卤醇脱卤酶突变体N176G的应用，其特征在于：将权利要求4所述重组基因工程菌经诱导培养获得的湿菌体或湿菌体经冷冻干燥获得的干细胞作为催化剂；以前手性化合物I为底物，在一定条件的磷酸盐缓冲液反应介质中进行反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得对应的S构型的手性环氧化合物II。

7.根据权利要求6所述的一种卤醇脱卤酶突变体N176G的应用，其特征在于：所述催化剂的制备方法是将含有卤醇脱卤酶突变体N176G编码基因的重组基因工程菌接种至含有硫酸卡那霉素的LB液体培养基中培养得到培养液；再将一定量的培养液接种到含有硫酸卡那霉素的TB液体培养基中，继续培养至菌液OD600＝0.6～0.8后，加入一定浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养，取诱导培养后的菌液经离心后，收集到的湿菌体或湿菌体经冷冻干燥获得的干细胞作为所述催化剂。