[发明专利]一种酶组合物及化学酶法合成玻色因的方法

权利要求书

1.一种化学酶法合成玻色因的方法，其特征在于，包括：

S1）将乙酰丙酮、木糖与碱性物质在溶剂中混合加热反应，得到第一中间产物；

S2）将所述第一中间产物、脱氢酶、辅酶、还原剂与异丙醇在磷酸缓冲液中混合，反应，得到玻色因；

所述脱氢酶包括酶A与酶B；

所述酶A为山梨醇脱氢酶或脱氢酶RDH；

所述脱氢酶RDH包括野生型RDH和/或RDH突变体；

所述野生型RDH的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述RDH突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：2~8任一项所示；

所述山梨醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；

所述酶B为PTDH；

所述辅酶选自β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸单钠盐；所述还原剂选自亚磷酸钠；

以室温一分钟转化1 μmol的底物所需酶量为U，所述酶A的用量为1000~10000 U；所述酶B的用量为2000~20000 U；

所述S2）反应的温度为25℃~40℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碱性物质选自碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、氢氧化钠、氢氧化钾与氢氧化锂中的一种或多种；

所述乙酰丙酮与木糖的摩尔比为（1~1.2）：1；

所述碱性物质与木糖的摩尔比为（1.2~2）：1；

所述S1）中加热反应的温度为70℃~90℃；所述加热反应的时间为10~16 h；

加热反应后，将反应溶液的pH值调节至中性，除去溶剂，得到第一中间产物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辅酶与第一中间产物的摩尔比为1：（500~1000）；所述还原剂与第一中间产物的摩尔比为1：（0.8~1.5）；所述异丙醇与第一中间产物的比例为（0.5~1.5）mL：1 g。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2）具体为：

将第一中间产物、辅酶、还原剂与异丙醇在磷酸缓冲液中混合，得到底液；

在底液中加入脱氢酶混合，反应，得到玻色因。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的时间为4~8 h；反应后，离心，上清液纳滤除盐后，除去水分，得到玻色因。

6.一种酶组合物，其特征在于，包括酶A与酶B；

所述酶A为RDH突变体；

所述RDH突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：2~8任一项所示；

所述酶B为PTDH。

7.一种RDH突变体，

所述RDH突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：2~8任一项所示。

8.编码权利要求7所述RDH突变体的核酸，其特征在于，其序列如SEQ ID NO：11~17任一项所示。