[发明专利]一种地龙生物活性小肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种来源于地龙且具有抗氧化生物活性的小肽，所述小肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。申请人首先从中药地龙中提取分离生物活性肽，接着通过液质联用、质谱解析、序列比对、分子对接和活性验证等大量试验从中筛选出具有较强抗氧化活性的小肽。该小肽为首次从中药地龙中分离鉴定，为充分利用地龙药材提供了新途径，同时也为抗氧化剂的开发提供了新资源。

技术领域

本发明涉及一种小肽，尤其是一种来源于地龙且具有抗氧化生物活性的小肽，本发明还涉及该小肽的制备方法和应用。

背景技术

人体细胞在代谢过程中会产生大量的活性氧(ROS)，机体的抗氧化防御系统可以有效地清除这些ROS，即正常情况下，ROS的产生和消除处于一种微妙的平衡状态。当ROS产生过量或机体抗氧化防御系统失效时，这种平衡就会被打破，机体将处于氧化应激状态。已有研究证实，氧化应激的损害可引发癌症、糖尿病、炎症、心血管疾病、哮喘以及阿尔茨海默病等多种慢性疾病。

抗氧化肽是近年来被广泛研究的一类生物活性肽，作为一种抗氧化剂，其结构相对简单、易吸收、稳定性好、低抗原，不仅具有较强的抗氧化活性，还具有降血压和抗癌等保健功效，在食品和医疗保健品领域越来越受到人们的关注。

地龙是我国名贵的中药材，已有研究表明地龙肽具有抗凝血、降血压、抗菌、抗炎、抗脑卒中、神经保护等多方面的药理作用。然而，尚未有地龙蛋白水解物小肽的抗氧化报导。因此，以地龙蛋白为原料开发抗氧化肽，可为深度利用地龙蛋白资源提供新途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种小肽及其制备方法和应用，该小肽来源于中药地龙，具有很好的抗氧化作用。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

申请人首先从中药地龙中提取分离生物活性肽，接着通过液质联用、质谱解析、序列比对、分子对接和活性验证等大量试验从中筛选出具有较强抗氧化活性的小肽，其氨基酸序列为PGAGAVY(SEQ ID No.1)或KDLY(SEQ ID No.2)。该小肽为首次从中药地龙中分离鉴定，为充分利用地龙药材提供了新途径，同时也为抗氧化剂的开发提供了新资源。

上述小肽具有分子量小，容易制备的优点，它既可以从中药地龙中提取分离，同时也能使用本领域所熟知的人工合成方法制备，由于分子量小，当使用合成方法制备时，还具有工艺简单、成本低廉等优点。

进一步地，本发明提供一种制备所述小肽的方法，该方法包括从中药地龙提取生物活性肽，然后从生物活性肽中分离目标肽段两个步骤，其中，所述生物活性肽的提取包括以下步骤：

(1)以中药地龙为原料，采用碱提酸沉法提取粗蛋白；

(2)向粗蛋白中加入蛋白酶进行酶解，膜分离后得到分子量小于5kDa的多肽。

所述目标肽段的分离可通过本领域所熟知的色谱法等，例如使用半制备或制备液相色谱进行分离，在已明确目标肽段分子结构的基础上，本领域技术人员在使用这些方法时无需克服技术障碍。

优选地，所述蛋白酶为碱性蛋白酶。

优选地，所述酶解的方法是将粗蛋白用水溶解成浓度为1-10％的溶液，然后按粗蛋白重量的1-5％向溶液中加入蛋白酶，在pH为7.5-10、温度为40-60℃条件下酶解1-5小时，加热灭活后离心，取上清液。

优选地，所述酶解的方法是将粗蛋白用水溶解成浓度为3-4％的溶液，然后按粗蛋白重量的2-3％向溶液中加入蛋白酶，在pH为8-9、温度为50-55℃条件下酶解2-3小时，加热灭活后离心，取上清液。

优选地，所述碱提酸沉法是将中药地龙磨粉后加入pH为8-11的氢氧化钠溶液，在50-70℃条件下浸提1-5h，离心后用HCl溶液调节上清液pH至3-6，静置沉淀后再次离心，将沉淀冻干。