[发明专利]一种基于高通量测序的线粒体基因组测序文库的构建方法及扩增引物

权利要求书

1.一种人线粒体扩增引物，其特征在于，包括引物对1和引物对2；

所述引物对1的上游引物MT1-F如SEQ ID NO.1所示，下游引物MT1-R如SEQ ID NO.2所示，所述引物对2的上游引物MT2-F如SEQ ID NO.3所示，下游引物MT2-R如SEQ ID NO.4所示。

2.一种人线粒体基因组扩增方法，其特征在于包括如下步骤：

以全血DNA为模板，采用权利要求1所述的人线粒体扩增引物进行PCR扩增。

3.根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增的PCR反应体系包括：5×PrimeSTAR GXL Buffer 10μL，dNTP Mixture(2.5mM each)4μL，PrimeSTAR GXL DNAPolymerase 1μL，模板DNA 1μL，10μM MT1-F/MT2-F 1μL，10μM MT1-R/MT2-R 1μL，NF·H₂O32μL。

4.根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增的PCR反应程序为：预变性98℃2min；98℃变性10s，68℃退火/延伸10min，进行32个循环；68℃延长15min；然后4℃保存。

5.一种基于高通量测序的线粒体基因组测序文库的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1)以全血DNA为模板，采用权利要求2-4任一项所述的人线粒体基因组扩增方法进行PCR扩增；

2)将两对引物扩增所得的mtDNA等量混匀，进行文库构建。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤2)包括：

2.1)将两对引物扩增所得的mtDNA等量混匀，用超声打断仪进行片段化；

2.2)将片段化产物进行修复以及末端加单碱基A；

2.3)进行接头连接反应；

2.4)进行磁珠纯化和片段筛选，质控检测完成文库构建。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤2.1)：分别取同一样本的MT1产物和MT2产物各500ng，混匀后加Nuclease-free ddH₂O补足体积至55μL，用超声打断仪进行片段化，打断时间为80s。

8.一种用于构建线粒体基因组测序文库的试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的人线粒体扩增引物。