[发明专利]一种裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法

说明书

本发明公开了一种裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法，属于林业无性繁殖技术领域，包括以下步骤：(1)外植体消毒；(2)初代愈伤诱导培养；(3)不定芽诱导培养；(4)不定芽继代培养；(5)生根培养；(6)苗木再生。本发明的裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法，取材方便、操作简便、苗木生长周期短、不受季节影响，能够在短时间内快速培育出裸果木组培苗，建立再生体系，解决裸果木有性繁殖困难的问题，同时也为裸果木优良种质资源培育、基因转化、遗传资源保存及工厂化育苗提供了一条新途径。

技术领域

本发明涉及一种裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法，属于林业无性繁殖技术领域。

背景技术

裸果木(学名：Gymnocarpos przewalskii Maxim)属于石竹科裸果木属，多年生矮灌木，具有多分枝、叶线形、两性花、花粉小等特征，是古地中海旱生植物区系的孑遗植物，在我国的甘肃、青海、内蒙古西部等地均有分布。同时因其分布区多为生态系统脆弱，又是荒漠地区动物食物的来源之一，裸果木的数量日益减少，分别于1987年和1997年，被认定为国家二级和一级保护植物。

裸果木自然结实率极低，有性繁殖困难，主要以无性繁殖的扦插和组织培养为繁殖技术手段。其中，扦插的成活率虽然高达80％，但受外界环境及季节影响大，不加选择的扦插也会加快苗木资源退化；植物组织培养技术不受季节影响，操作简单，可在短时间内培育出遗传性状优良的组培苗。目前，仅有以裸果木下胚轴为外植体，成功培育出再生植株，已知以裸果木下胚轴为外植体的生根配方为1/2MS+30g/L糖+7g/L琼脂，生根率达86％。但就实际实验结果来看，此配方在生根过程中，有大量愈伤组织生成，影响后续移栽的成活率。尚未发现以裸果木茎段为外植体获得愈伤，由器官发生途径分化不定芽的再生体系建立的育苗方法。

因此，提供一种裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法，以裸果木茎段为外植体获得愈伤组织，由愈伤组织进行组织培养，通过调节6-BA与IBA两种激素不同浓度配比，实现裸果木不定芽分化和增殖，再经过生根诱导培养，快速培育出裸果木再生苗，建立组织培养再生体系，就成为该技术领域急需解决的技术难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法，以裸果木茎段为外植体获得愈伤组织，由愈伤组织进行组织培养，通过调节6-BA与IBA两种激素不同浓度配比，实现裸果木不定芽分化和增殖，再经过生根诱导培养，快速培育出裸果木再生苗，建立组织培养再生体系。

本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：

本发明是通过如下步骤实现的：

一种裸果木器官发生途径的组织培养再生体系建立的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的消毒

裸果木茎段截成短枝，置于容器内，流水冲洗，取出，放入超净工作台内，酒精清洗，无菌水清洗，4％次氯酸钠消毒，无菌水清洗，无菌滤纸吸干水分；

(2)初代愈伤诱导培养

将消毒后的茎段接种到初代培养基内，诱导形成愈伤；

(3)不定芽诱导培养

将步骤(2)形成的愈伤组织接种到含琼脂的培养基内，诱导愈伤组织形成不定芽；

(4)不定芽继代培养

将步骤(3)含不定芽的愈伤块接种到含MS+0～2mg/L 6-BA+0～2mg/L IBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基内，pH控制在5.85-5.95，温度25±2℃，光照时间16h/d，光照强度2500LX，诱导不定芽继续分化，长出丛芽；

(5)生根培养

将步骤(4)获得的不定芽分别接种到含琼脂的培养基内，进行生根培养；