[发明专利]肝素裂解酶在枯草芽孢杆菌中的融合表达及其应用

权利要求书

1.一种融合表达肝素裂解酶的方法，其特征在于，将来源于Bacteroidesthetaiotaomicron的肝素裂解酶I和肝素裂解酶III利用连接肽融合并在枯草芽孢杆菌中表达。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝素裂解酶I的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述肝素裂解酶III的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将肝素裂解酶III融合于肝素裂解酶I的N端或C端；所述连接肽包括但不限于GGGGS、GGGSGGSG、GGGGGGGG、GGSGGSGGSGGS、GGGGSGGGGSGGGGS、GSGGGSGGGGSGGGGS。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以pSTOP1622质粒为骨架，利用启动子P_xylA、P_spovG、P_lytR或P₄₃启动肝素裂解酶的表达。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在肝素裂解酶I的N端插入序列，所述序列包括bltD、cspB、C4、yxjG、ydbD、valS、tufA、ybdD、yvyD或glnA。

6.权利要求1～5任一所述方法制备得到的融合肝素裂解酶。

7.一种制备低分子量肝素的方法，其特征在于，以肝素钠为底物，加入权利要求6所述融合肝素裂解酶，反应后得到低分子量肝素钠。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述融合肝素裂解酶的添加量不少于1200U/g底物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在pH为7.4±0.2的体系中进行反应。

10.权利要求6所述融合肝素裂解酶在制备低分子量肝素中的应用。